[发明专利]抗神经生长因子抗体及其制备和使用方法

说明书

本发明提供了一种制备适用于猫的抗体的方法。还提供了与猫神经生长因子(NGF)特异性结合且中和猫NGF结合p75或TrkA猫NGF受体能力的嵌合抗体和猫源化抗体。本发明延及编码所述抗体的核酸和使用所述抗体和/或核酸治疗猫疼痛和关节炎的方法。

技术领域

本发明涉及充当猫神经生长因子的拮抗剂抗体及其片段。本发明还涉及制备这些抗体的方法以及这些抗体和片段在治疗猫的与神经生长因子相关的病症中的治疗用途，例如疼痛、疼痛相关病症以及导致疼痛发作的病症。

背景技术

神经生长因子(NGF)是天然存在的分泌蛋白，其由α多肽链、β多肽链和γ多肽链构成。NGF是神经营养因子家族的成员，其参与许多不同的作用。NGF促进感觉神经元和交感神经元的生存和分化，并且通过两类膜结合受体即低亲和性NGF受体p75和高亲和性NGF受体跨膜酪氨酸激酶TrkA来传达信号。NGF与TrkA或p75的结合导致感觉神经元中神经肽的上调。

已经描述了使用NGF拮抗剂治疗人类的疼痛和疼痛敏感(Cattaneo A.、Curr.Op.Mol.Ther.2010 12(1):94-106)。例如，国际专利申请WO2006/131951描述了人源化形式的大鼠αD11(aD11)单克隆抗体。αD11抗体对小鼠NGF具有结合特异性，但已知也与人类和大鼠形式的NGF结合。在施用至人之前，需要对αD11大鼠衍生单克隆抗体进行人源化，从而使产生的中和抗体最少，该中和抗体是由人类对啮齿类衍生抗体的抗大鼠抗体(HAMA)反应产生的。而且，用人恒定结构域取代小鼠恒定结构域允许选择下游效应子功能。

目前，通过施用数种镇痛剂包括局部和全身麻醉剂、麻醉性镇痛剂、α2拮抗剂、非类固醇抗炎药(NSAIDs)和类固醇来进行猫的疼痛管理。这些药物中的每一种都需要频繁地施用并且在功效和安全性方面也有局限性。因此，对于患有慢性疼痛例如患有神经病理性疼痛或肿瘤疼痛的猫，需要不频繁施用且持久有效的疼痛缓解。

虽然NGF在猫组织中表达，但只有部分克隆是可用的序列。该部分mRNA序列在GenBank登录号EF065101(URL:http://www.ncbi.nlm.nih.gov.Felis catus nervegrowth factor beta-like mRNA，猫神经生长因子-β类mRNA)中限定。但该文章既没有描述猫NGF的拮抗剂，也没有在猫中使用阻塞NGF介导的信号传导以防止或缓解疼痛。由于无法确定与另一物种中表达的神经生长因子具有结合特异性的抗体是否也结合猫神经生长因子，因此在猫中使用在其他物种中充当抗NGF拮抗剂的已知抗体并不可行。而且，由于所施用的抗体将被猫免疫系统识别为外来的，因此也存在产生针对任何施用的抗体的中和抗体的可能性。另外，中和抗体的产生将限制该抗体的长期施用至猫，当治疗慢性疼痛相关病症或癌性病症时，这是特别重要的条件。此外，对猫施用来源于另一物种的抗NGF抗体可以显示与存在于猫中但并不存在于该抗体原始来源的物种中的其他靶表位的交叉反应。因此，迫切需要用于猫疼痛治疗中充当猫NGF拮抗剂的结合成员(binding member)，其中该结合成员保持高水平的结合亲和性与亲合力，同时避免了针对其的中和抗体的产生。

发明概述

经过大量的努力，本发明人意外地发现了所制备的特异性结合猫NGF的非免疫原性嵌合抗体和猫源化抗体以及衍生自其的结合片段。特别是，出乎意料地，本文表明，本发明的抗体及其结合片段与猫NGF的结合，通过抑制猫NGF与高亲和性TrkA受体或与p75受体的结合，隔绝了猫NGF的生物活性。这反过来阻止了感知神经元中神经肽的上调，结果减轻或消除了痛觉。使用重组DNA方法生产抗体，使得该抗体基本上是非免疫原性的，也就是说，在施用至猫个体之后，针对该抗体的中和抗体并未产生。由于使用标准方法例如CDR移植等并未产生抗体，因此这样的发现是令人惊讶且完全出乎意料的。

根据本发明的第一方面，提供了制备适合用于猫中的抗体的方法，其包括或基本上由以下步骤组成：

从猫之外的物种提供供体抗体，其中所述供体抗体对猫中存在的靶抗原有结合特异性；