[发明专利]染色体着陆垫及相关用途

说明书

对优先权文件的引用

本申请根据35U.S.C.§119(e)要求2011年4月5日提交的美国临时专利申请序列号61/516,612的优先权。本申请要求上述提交日的优先权，上述临时专利申请的公开内容通过引用以其整体纳入本文。

序列表的纳入

本申请包括与纸质序列表对等的电子版序列表，通过EFS网站电子提交，还包括通过EFS网站电子提交的计算机可读形式的序列表，含有文件名为“37651505001WOSEQUENCELISTING.txt”的文件，该文件大小为213476字节，创建于2012年4月5日，这些序列表通过引用以其整体纳入本文。

背景技术

出于治疗目的（例如，基因治疗）以及在体外生产有用的蛋白或多肽时，会常规地将异源多核苷酸整合到哺乳动物细胞的基因组中。通过非同源重组在基因组的随机位置插入需要几轮筛选和克隆扩增以产生可接受的表达系统。每次寻找针对新基因的表达系统时还需要重复这种方法。由于整合事件的随机性，插入了重组基因的一些位置根本不能支持转录事件。这是因为表达水平很大程度上受基因位点上局部遗传环境作用（位置作用）的影响。此外，来自很多染色体位点的表达随时间而减少。某些情况下，这种不稳定性是由于转基因的DNA甲基化。因此，根据整合的位点，整合的基因的表达水平可能有很大的差异。此外，某些情况下，随机整合入基因组的外源DNA会打断重要的细胞基因，产生改变的表型。

除随机插入以外，已描述了重组酶介导的整合，用于将转基因插入到基因组中的特定位点。然而，获得整合的转基因的稳定、高效表达仍然是很复杂和繁琐的，需要大量被筛选的克隆以选择所需的整合细胞。

本领域需要用于在哺乳动物细胞中实现异源多核苷酸的稳定整合和/或高水平基因表达的方法。本公开解决了这一需要以及其它需要。

发明内容

一方面，本申请提供了用于在宿主细胞中稳定整合和表达异源多核苷酸的方法。所述方法包括将异源多核苷酸插入到宿主细胞基因组中位于选自下组的基因之内或附近的天然染色体位点处：锚蛋白2基因(Ank2)、切割和多腺苷酸化特异性因子4基因(Cpsf4)、C-Mos基因和Nephrocystin-1/Mal基因。一些方法中，用同源重组或杂合重组酶介导异源多核苷酸插入到宿主基因组中。一些方法中，宿主细胞是哺乳动物细胞，例如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。在一些此类方法中，天然染色体插入位点位于或靠近以下位置：Ank2基因SEQ ID NO:1的位置130-131，Cpsf4基因SEQ ID NO:2的位置629-630，C-Mos基因SEQ ID NO:3的位置272-273，或Nephrocystin-1/Mal基因SEQ ID NO:4的位置239-240。一些方法中，待整合到宿主基因组的异源多核苷酸可编码多肽，例如治疗性蛋白或工业蛋白。