[发明专利]染色体着陆垫及相关用途

权利要求书

1.在宿主细胞中稳定整合并表达异源多核苷酸的方法，包括将所述异源多核苷酸插入到宿主细胞基因组中位于选自下组的基因之内或附近的天然染色体位点处：锚蛋白2基因(Ank2)、切割和多腺苷酸化特异性因子4基因(Cpsf4)、C-Mos基因和Nephrocystin-1/Mal基因。

2.权利要求1的方法，其中所述异源多核苷酸的插入是由同源重组或由杂合重组酶介导的。

3.权利要求1的方法，其中所述宿主细胞是哺乳动物细胞。

4.权利要求1的方法，其中所述宿主细胞是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。

5.权利要求4的方法，其中天然染色体插入位点位于或靠近以下位置：Ank2基因SEQ ID NO:1的位置130-131，Cpsf4基因SEQ ID NO:2的位置629-630，C-Mos基因SEQ ID NO:3的位置272-273，Nephrocystin-1/Mal基因SEQ ID NO:4的位置239-240。

6.权利要求1的方法，其中所述异源多核苷酸编码多肽。

7.权利要求6的方法，其中所述多肽是治疗性蛋白或工业蛋白。

8.用于将异源多核苷酸序列稳定整合到哺乳动物细胞基因组中的重组多核苷酸，含有：

第一同源臂、所述异源多核苷酸序列、和第二同源臂；

其中所述第一和第二同源臂分别与侧接于位于选自下组的基因之内或附近的天然染色体插入位点的5’-和3’-序列基本相同：锚蛋白2基因(Ank2)、切割和多腺苷酸化特异性因子4基因(Cpsf4)、C-Mos基因和Nephrocystin-1/Mal基因。

9.权利要求8的多核苷酸，其中所述天然染色体插入位点支持外来基因的稳定整合。

10.权利要求8的多核苷酸，其中所述异源多核苷酸序列编码多肽。

11.权利要求8的多核苷酸，其中所述多肽是治疗性蛋白或工业蛋白。

12.权利要求8的多核苷酸，其中所述异源多核苷酸序列包含位点特异性重组序列(染色体着陆垫)。

13.权利要求12的多核苷酸，其中所述位点特异性重组序列是被噬菌体整合酶识别的识别序列。

14.权利要求13的多核苷酸，其中所述噬菌体整合酶是phiC-31整合酶。

15.权利要求13的多核苷酸，其中所述识别序列是被所述噬菌体整合酶识别的attP位点或attB位点。

16.权利要求8的多核苷酸，其中所述哺乳动物细胞是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。

17.权利要求16的多核苷酸，其中所述天然染色体插入位点位于或靠近以下位置：Ank2基因SEQ ID NO:1的位置130-131，Cpsf4基因SEQ ID NO:2的位置629-630，C-Mos基因SEQ ID NO:3的位置272-273，Nephrocystin-1/Mal基因SEQ ID NO:4的位置239-240。

18.包含权利要求8的重组多核苷酸的载体。

19.工程化的哺乳动物细胞，包含稳定整合到其基因组中位于选自下组的基因之内或附近的一个或多个天然染色体插入位点处的异源多核苷酸：锚蛋白2基因(Ank2)、切割和多腺苷酸化特异性因子4基因(Cpsf4)、C-Mos基因和Nephrocystin-1/Mal基因。

20.权利要求19的细胞，其中所述天然染色体插入位点支持外来基因的稳定整合。

21.权利要求19的细胞，其中所述异源多核苷酸序列编码多肽。

22.权利要求21的细胞，其中所述多肽是治疗性蛋白或工业蛋白。

23.权利要求19的细胞，其中所述异源多核苷酸包含位点特异性重组序列(染色体着陆垫)。

24.权利要求23的细胞，其中所述位点特异性重组序列是被噬菌体整合酶识别的识别序列。

25.权利要求24的细胞，其中所述噬菌体整合酶是phiC-31整合酶。