[发明专利]用于核酸操作的方法和材料

权利要求书

1.核酸连接方法，包括步骤

a)提供待连接的一组至少3个核酸，其中所述核酸片段包含成对的可相容末端，并且其中至少两个所述核酸片段至少在所述各自可相容末端的区域中是双链的，并且其中所述各自可相容末端的每一相反链包含为非酶促去除所配置的核苷酸，

b)非酶促去除为非酶促去除所配置的此类核苷酸，

c)在杂交条件下混合所述核酸片段。

2.权利要求1的核酸连接方法，其中所述可相容末端具有5-25个核苷酸长度。

3.前述权利要求中任一项的核酸连接方法，其中对于每一可相容末端区域，为非酶促去除所配置的核苷酸的数量为5-25个。

4.前述权利要求中任一项的核酸连接方法，其中至少一个片段在进行步骤b)之后包含双链部分。

5.前述权利要求中任一项的核酸连接方法，其中在步骤c)中，至少两个核酸片段以20:1-1:20的摩尔比混合。

6.前述权利要求中任一项的核酸连接方法，其中为非酶促去除所配置的核苷酸包含硫代磷酸酯骨架。

7.权利要求6的核酸连接方法，其中步骤b)包含将所述片段暴露于碘和乙醇。

8.核酸改变方法，包括步骤：

a)提供模板核酸，并提供扩增所述模板核酸的模板部分的引物，其中一个或全部引物具有为非酶促去除所配置的核苷酸，

b)扩增所述模板核酸的所述模板部分，以获得核酸片段，

c)重复步骤a)和b)，以获得至少2个核酸片段，

d)在步骤c)的所述核酸片段上进行前述权利要求中任一项的核酸连接方法，并且其中在步骤c)中获得了仅两个核酸片段，引入了至少一个另外的核酸片段。

9.权利要去8的核酸改变方法，其中由于一个或多个

-点突变，

-序列部分的顺序和/或数量和/或方向，

-与转录和/或翻译影响位点有效连接，

-转录和/或翻译序列部分的顺序和/或数量和/或长度，

通过连接所述核酸片段获得的所述产物不同于至少一种所述模板和/或参照核酸。

10.权利要求9的核酸改变方法，其中至少一个第一引物与模板核酸的相应部分有至少一个核苷酸不同。

11.转化方法，包括步骤

a)进行权利要求1-10中任一项的核酸连接方法，和

b)用步骤a)中获得的所述连接的核酸转化靶细胞。

12.权利要求1的转化方法，其中所述连接的片段形成克隆载体。

13.具有为非酶促去除所配置的核苷酸的核酸的用途，用于产生相对于模板或参照核酸至少一个差异，其中差异独立地选自：

-点突变，

-序列部分的顺序和/或数量和/或方向的差异，

-与转录和/或翻译影响位点有效连接的差异，

-转录和/或翻译的序列部分的顺序和/或数量和/或长度的差异。

14.用于连接至少3个核酸片段的试剂盒，其包含

-对于每一片段，具有为非酶促去除所配置的核苷酸的两种扩增引物，和

-一种或多种非酶促核苷酸去除剂。

15.计算机程序产品，其包含机器可解释的数据载体，所述数据载体包含一组指令，当通过核酸处理装置解释时，所述指令使所述装置实施权利要求1-12中任一项的方法。