[发明专利]生物材料的透明化方法、及其利用

说明书

技术领域

本发明涉及一种生物材料的透明化方法、及其利用。

背景技术

在使用光学显微镜观察不透明的组织内部时，将会使用透明化试剂来进行预处理(透明化处理)。

关于透明化试剂及预处理方法，具代表性的例如已有专利文献1及非专利文献1中揭示的由Ann-Shyn Chiang提出的Focus Clear(商品名)溶液、或非专利文献2中揭示的由Hans-Ulrich Dodt等人提出的组织透明法(tissue clearing method)。这些技术均用以使组织透明化，目的在于观察存在于组织中的荧光物质。

[现有技术文献]

专利文献1：美国专利第6472216号公报；授权日2002年10月29日。

非专利文献1：Ann-Shyn Chiang et al.：Insect NMDA receptors mediate juvenile hormone biosynthesis.PNAS99(1)，37-42(2002).

非专利文献2：Hans-Ulrich Dodt et al.：Ultramicroscopy：three-dimensional visualization of neuronal networks in the whole mouse brain.Nature Methods4(4)，331-336(2007).

发明内容

[本发明要解决的问题]

由于上述方法均需要将有机溶剂用作透明化处理的有效成分等，因此有难以适用于活组织，适用对象一味地限于固定化样品的问题。另外，还有导致作为透明化处理的对象的生物材料引起收缩的问题。

在本发明以前，本发明的发明者们发现如果使用尿素，便能使生物材料透明化。由于尿素是生物亲和性优异的成分，因此如果将尿素或尿素衍生物用作透明化处理的有效成分，就能解决上述的问题。

本发明的发明者们还着手于开发用尿素或尿素衍生物来实现更有效的生物材料透明化处理的方法。

本发明正是为了解决上述课题而完成的，其目的在于提供一种使用生物亲和性优异的成分来使生物材料透明化的更有效率的方法、及其利用。

[用以解决问题的技术方案]

为了解决上述问题，本发明的发明者们进行了锐意研究。结果新发现了通过对有效成分为尿素等的不同浓度的溶液进行组合，便既能抑制不要的体积变化，又能更有效率地进行透明化处理，从而完成了本发明。

即，本发明的生物材料的透明化方法的特征在于包括：第一浸润步骤，使以规定的浓度而含有选自由尿素及尿素衍生物所组成的群中的至少一种化合物的溶液，浸润到生物材料中；第二浸润步骤，继而使以比第一浸润步骤中用的所述溶液高的浓度而含有选自由尿素及尿素衍生物所组成的群中的至少一种化合物的溶液，浸润到所述生物材料中。

本发明的透明化方法也可以在第二浸润步骤之后还包括第三浸润步骤，即：使以比第二浸润步骤中用的所述溶液低的浓度而含有选自由尿素及尿素衍生物所组成的群中的至少一种化合物的溶液，浸润到所述生物材料中。

在本发明的透明化方法中，作为优选，所述第一浸润步骤中所用的溶液和所述第三浸润步骤中所用的溶液以实质上相同的浓度含有所述化合物。

在本发明的透明化方法中，作为优选，所述第一浸润步骤中所用的溶液与所述第三浸润步骤中所用的溶液为相同的溶液。

在本发明的透明化方法中，作为优选，所述第一浸润步骤、第二浸润步骤、以及视需要而进行的第三浸润步骤中所用的溶液均含有尿素来作为所述化合物。

在本发明的透明化方法中，作为优选，所述第一浸润步骤、第二浸润步骤、以及视需要而进行的第三浸润步骤中所用的溶液的至少一方为水溶液。

在本发明的透明化方法中，作为优选，所述第一浸润步骤、第二浸润步骤、以及视需要而进行的第三浸润步骤中所用的溶液的至少一方含有表面活性剂。

在本发明的透明化方法中，作为优选，所述表面活性剂为非离子性表面活性剂。

在本发明的透明化方法中，作为优选，所述非离子性表面活性剂为选自由TritonX(注册商标)、Tween(注册商标)、及NP-40(商品名)所组成的群中的至少一种。

在本发明的透明化方法中，作为优选，所述水溶液还含有水溶性的高分子化合物。

在本发明的透明化方法中，作为优选，水溶性的所述高分子化合物为选自由Percoll(注册商标)、Ficoll(注册商标)、聚乙二醇、及聚乙烯吡咯烷酮所组成的群中的至少一种。