[发明专利]重组多肽的制造方法

说明书

【技术领域】

本发明涉及重组多肽的制造方法，更具体而言，使用核因子κB抑制物α（NfkBia）的表达降低的动物细胞有效制造多肽的方法。

【背景技术】

使用基因重组技术，生产作为医药有用的蛋白质之时，使用动物细胞，则由于原核细胞无法进行的复杂的翻译后修饰或折叠变得可能，动物细胞多用作用于重组蛋白质生产的宿主细胞。

近年、抗体或生理活性蛋白质等的多种生物药品辈出，在动物细胞中有效生产重组蛋白质的技术关系到生物药品的低成本化，从而约束向患者的稳定的供给。

从而，期望生产效率更高的蛋白质的制造方法。

NfkBia（IKBα、核因子κB抑制物α）是B-细胞抑制物中κ多肽基因增强子的核因子，α的简称，与作为涉及细胞内的信号传递的转录因子的NF-κB的活化相关。NfkBia是NF-κB的失活因子之一。新生物合成的NfkBia通过在核内诱导表达，负调节NF-κB的DNA结合和转录活性（非专利文献1）。另外，如NfkBia一样抑制细胞增殖的一部分的基因表达在几乎全部的小鼠或人肿瘤细胞中被抑制（非专利文献2）。NF-κB通常与如NfkBia一样的失活因子结合着存在，但由各种刺激从失活因子游离活化，迁移到核内，与在细胞因子、生长因子、粘接分子、细胞死亡控制因子其他各种各样的目标基因的启动子/增强子区域的特异性DNA序列（5’-GGGACTTTCC-3’、称为NFκB结合序列、kB基序、NFkB应答元件等（SEQ ID NO:35））结合，与转录活性的调节相关（非专利文献3）。

另一方面，作为在动物培养细胞内的NfkBia的行为，不知与重组蛋白质的产生能力的关系。

【现有技术文献】

【非专利文献】

非专利文献1:Inducible nuclear expression of newly synthesized I kappa B alpha negatively regulates DNA-binding and transcriptional activities of NF-kappa BMol.Cell.Biol.,051995,2689-2696,Vol15,No.5

非专利文献2:From mice to humans:Identification of commonly deregulated genes in mammary cancer via comparative SAGE studies Hu Y.,Sun H.,Drake J.,Kittrell F.,Abba M.C.,Deng L.,Gaddis S.,Sahin A.,Baggerly K.,Medina D.and Aldaz C.M.Cancer Research 200464:21(7748-7755)

非专利文献3:″New insights into the Role of Nuclear Factor-kappa B in Cell Growth Regulation″American Journal of Pathology,2001,Vol.159,No.2:387-397

【发明内容】

【发明要解决的技术课题】

本发明旨在提供能以高的生产量制造天然型蛋白质或重组蛋白质的方法。

【解决课题的技术方案】

本发明人为了解决上述课题进行锐意努力，以有高的产生重组抗体的能力的培养细胞株（CHO细胞株）作为材料，对于在所述细胞株中表达显著的基因进行检查的结果，鉴定一种mRNA型非编码RNA，其通过使用特定的小鼠序列作为探针而被识别。此转录产物相当于NfkBia的mRNA的非翻译区域的互补链。又发现，通过在重组培养细胞中表达由此转录产物中的一部分的序列组成的核酸分子，显著地升高所述培养细胞的重组多肽的产生能力。另外，本发明人发现，在所述非编码RNA的表达上调的高产生抗体的细胞中NfkBia的表达被抑制。再者，本发明人发现，有高的重组抗体产生能力的培养细胞在细胞内NfkBia的表达被抑制。从而认为，通过高表达控制培养细胞内的NfkBia的表达的转录产物，可增加希望得到的多肽的生产量，从而完成本发明。

在本说明书中，将这样的通过在培养细胞内表达量增加，有升高重组抗体等的蛋白质的产生能力的功能的RNA或DNA或它们的序列总称而命名为APES（抗体产生增强序列）（根据情况，称为PPES（多肽产生增强序列））。