[实用新型]肝豆状核变性致病基因突变检测试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型提供了一种肝豆状核变性致病基因突变检测试剂盒，属于分子生物学技术领域。

背景技术

P型ATP酶(ATP7Base，ATP7B)基因定位于13q14.3，全长约80kb，含有21个外显子和20个内含子，其cDNA编码一种由1411个氨基酸组成的P型铜转运ATP酶。该酶主要分布在肝、肾和胎盘，而少见于心、脑、肺和肌肉等组织，其主要生物学功能是在高尔基体内接受铜伴侣蛋白传递的铜，合成铜蓝蛋白，另外可以在高铜环境下重新定位，携带所结合的铜促使其从胆汁中排出。当ATP7B基因发生突变，其编码的P型ATP酶功能会部分或全部丧失，不能将多余的铜离子从细胞内转运出去，使铜离子在特定的器官和组织沉积，进而导致肝豆状核变性的发生。肝豆状核变性又称Wilson病(Wilson′s disease，WD)，是一种呈常染色体隐性遗传的铜代谢缺陷病。国外的流行病学调查显示，其发病率为1/10000至1/30000，基因频率为0.3％-0.7％，杂合子频率估计为1/100。我国南方发病率约为1/10000，据神经遗传专科门诊病例分析报道，Wilson病居全部单基因遗传病的第二位。

目前，国内外已发现ATP7B基因突变200余种，这些突变位点几乎分布于ATP7B基因的各个外显子，甚至有的还分布在内含子或剪接区内，突变类型包括错义突变、无义突变、缺失和插入等，ATP7B的突变方式多种多样，但主要以点突变为主，且多累及ATP酶功能区，而不是金属离子结合区。并且在不同地域人群中所发现的热点突变区明显不同。1995年Thomas等报道了3例中国香港人ATP7B患者，他们的ATP7B基因上都存在R778L(exon8)纯合突变，这是有关中国人该病基因外显子突变类型的首次报道。1996年台湾学者Chuang等报道在台湾ATP7B患者中检测到了该位点的两种突变：R778L和R778Q，突变率分别为11.4％和9.1％。上海刘晓青等报道R778L突变频率为47.2％，未发现R778Q突变。Ye等对中国东部50例ATP7B患者研究后指出，R778L突变频率高达60％。进一步研究表明，我国ATP7B与白种人的外显子突变特点有明显差异，第8号外显子R778L突变是中国人群的高频突变点，其突变频率为11.4％～60％。Park等检测了120例韩国ATP7B患者，R778L突变频率达39.2％，同时日本研究结果也表明R778L是高频突变点。8号外显子位于ATP7B蛋白的跨膜功能区，该位点的突变可引起蛋白的1级和2级结构改变，导致铜转运在细胞膜上停滞。12号外显子的T935M突变也是我国肝豆状核变性基因突变热点，在吴志英等对44例肝豆状核变性患者的研究中指出，18.1％的患者在12号外显子上检测到突变，其中T935M突变占6.8％，G943D占2.3％，此2种突变国外均未见报道。综上所述，ATP7B基因突变位点和形式多种多样，中国人群中WD患者ATP7B基因外显子8与外显子12的点突变最为常见。

发明内容

本实用新型的目的是提供一种检测肝豆状核变性致病基因是否发生突变的试剂盒。

为实现以上目的，本实用新型提供了一种肝豆状核变性致病基因突变检测试剂盒，其特征在于，包括包装盒体，包装盒体内的中间设有口腔拭子，口腔拭子的一侧设有样本保存管和含有PCR扩增试剂的试管，另一侧设有含有PCR产物纯化试剂的试管和含DNA测序试剂的试管。

本实用新型将样本采集、肝豆状核变性致病基因常见突变位点检测整合在一个试剂盒内，使用更方便快捷，且成本更低。本实用新型基于直接测序技术，可以对PCR产物直接进行DNA序列分析，明确突变位点，是现有基因突变检测方法中最直接最准确的方法，且可以实现机械化自动化，使测序工作更加简便快捷，结果判读更直观。

附图说明

图1为本实用新型提供的一种肝豆状核变性致病基因突变检测试剂盒结构示意图；

图2为ATP7B基因第8号外显子实验无突变的结果示意图；

图3为ATP7B基因第8号外显子实验有突变的结果示意图；

图4为ATP7B基因第12号外显子实验无突变的结果示意图；

图5为ATP7B基因第12号外显子实验有突变的结果示意图。

具体实施方式

为使本发明更明显易懂，兹以优选实施例，并配合附图作详细说明如下。

实施例