[实用新型]苯丙酮尿症致病基因突变检测试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型提供了一种苯丙酮尿症致病基因突变检测试剂盒，属于分子生物学技术领域。

背景技术

苯丙氨酸羟化酶(phenylalaninehydroxylase，PAH)基因定位于染色体12q22-24.2，全长约90kb，包括13个外显子和12个内含子。外显子长为1353bp的单链，mRNA翻译成含451个氨基酸的酶单体，单体聚合成有功能的PAH酶。PAH基因突变可导致肝脏苯丙氨酸羟化酶缺乏，苯丙氨酸不能正常转化为酪氨酸，从而在肝脏中代谢紊乱，导致患儿出现苯丙酮尿症(phenylketonuria，PKU)。苯丙酮尿症是一种氨基酸代谢异常的常染色体隐性遗传病。在欧美地区的发病率为1/10000，在我国是1/16000，杂合子频率为1/50。

迄今已经发现PKU有440多种致病突变，国内仅发现30余种突变。PAH基因的突变大部分是错义突变，致病突变大多位于外显子或内含子与外显子的交接区，严重影响苯丙氨酸羟化酶基因转录和翻译及蛋白质的异常折叠、聚合，以及加速降解，从而影响苯丙氨酸羟化酶的催化活性。在不同种族和地区人群之间苯丙氨酸羟化酶基因座突变部位及分布具有较大差异。中国北方人群PAH最常见的突变是R243Q(22.1％)，其次是EX6-96A＞G、R111X、R413P和Y356X。而台湾PKU的发病率和突变图谱与大陆存在很大的差异，台湾中以轻型PKU为主，突变以R241C和R408Q最常见，发生率分别为32％和14％；其次是R243Q，其在台湾人群的发病率低于大陆人群的发病率。

发明内容

本实用新型的目的是提供一种检测苯丙酮尿症致病基因PAH是否发生突变的试剂盒。

为实现以上目的，本实用新型提供了一种苯丙酮尿症致病基因突变检测试剂盒，其特征在于，包括包装盒体，包装盒体内的一侧设有口腔拭子，另一侧设有样本保存管、含有PCR扩增试剂的试管、含有PCR产物纯化试剂的试管和含DNA测序试剂的试管。

本实用新型将样本采集、苯丙酮尿症致病基因突变位点检测整合在一个试剂盒内，使用更方便快捷，且成本更低。本实用新型基于直接测序技术，可以对PCR产物直接进行DNA序列分析，明确突变位点，是现有基因突变检测方法中最直接最准确的方法，且可以实现机械化自动化，使测序工作更加简便快捷，结果判读更直观。

附图说明

图1为本实用新型提供的一种苯丙酮尿症致病基因突变检测试剂盒结构示意图；

图2为PAH基因第7号外显子实验无突变的结果示意图；

图3为PAH基因第7号外显子实验有突变的结果示意图。

具体实施方式

为使本发明更明显易懂，兹以优选实施例，并配合附图作详细说明如下。

实施例

如图1所示，为本实用新型提供的一种苯丙酮尿症致病基因突变检测试剂盒的结构示意图，包括带盒盖的包装盒体1，包装盒体1靠近盒盖的一侧，即包装盒体1的后侧放置有口腔拭子2，前侧放置四个2×2排列的试管，分别是位于左后的样本保存管3、位于右后的含有PCR扩增试剂的试管4、位于左前的含有PCR产物纯化试剂的试管5和位于右前的含DNA测序试剂的试管6。

测试步骤如下：

步骤1：采集检测样品

用口腔拭子2在被测者口腔左右两腮分别各上下刮20次，保证采集到足量的细胞样本，采集完毕，样本保存于样本保存管3中。

步骤2：采用硅胶吸附法抽提样本的基因组DNA。

步骤3：PCR扩增

PCR扩增试剂(总体积为1ml)的成分包含：20mM Tris-HCL(PH8.0)、100mM KCL、500uM dNTPs、3mM MgCl2溶液、0.1U Taq DNA聚合酶/u1。

苯丙氨酸羟化酶(PAH)检测引物信息如下：

第1对引物扩增PAH外显子1

PAH-1F：cctcctgcgtcaggacaac；

PAH-1R：ttcgttggaagctgatgagaa。

第2对引物 扩增PAH外显子2

PAH-2F：ttgctttftccatggaggttt；

PAH-2R：acaggatctggaacaggcaga。

第3对引物 扩增PAH外显子3

PAH-3F：tgtgaactaactgccccacct；

PAH-3R：ttgctgttattttgcggaagc。

第4对引物 扩增PAH外显子4