[实用新型]一种对石蜡组织的EGFR外显子基因突变检测试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型涉及一种检测试剂盒，尤其是涉及一种对石蜡组织的EGFR外显子基因突变检测试剂盒。

背景技术

EGFR是一种蛋白酪氨酸激酶受体(RTK)，位于第7号染色体p13～q22区，全长200kb，由28个外显子组成，编码1186个氨基酸，其糖蛋白分子量约170kDa。EGFR家族有4个结构相似的受体分子：ErbB1(EGFR)、ErbB2(HER2)、ErbB3(HER3)、ErbB4(HER4)。EGFR诱导癌症至少通过3种机制：EGFR配体的过表达，EGFR的扩增或EGFR的突变活化。在这3种机制中，EGFR的突变活化是导致肿瘤细胞异常生物学行为的最主要因素。

基于EGFR在肿瘤细胞过表达的特点，目前已开发出多种EGFR靶向药物。按照作用机制，可将其分为5种：1)作用于EGFR激酶区的小分子酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)，如吉非替尼(Gefitinib)、厄洛替尼(Erlotinib)；2)作用于EGFR胞外域部分的单克隆抗体(mAb)，如西妥昔单抗(Cetuximab)、帕尼单抗(Vectibix)；3)利用RNAi作用机理，特异性降解EGFR；4)与EGFR单克隆抗体偶联的细胞毒素、细胞杀伤因子、放射性粒子等，选择性杀死富含EGFR的肿瘤细胞；5)阻碍EGFR的二聚化/寡聚化进而抑制EGFR的激活。其中EGFRTKI药物在治疗非小细胞肺癌(NSCLC)临床疗效明显，已被推荐为晚期患者的一线药物。

常用的EGFR-TKI包括吉非替尼和厄洛替尼，是目前NSCLC患者最有效的靶向药物。但EGFR-TKI并非对所有患者都有效。EGFR外显子18、19或21发生突变的患者，吉非替尼有效率可高达80％，而野生型患者基本无效。EGFR敏感突变是药物有效的前提1-4。但部分EGFR-TKI初始治疗有效的患者后期会发生耐药，与EGFR E20突变密切相关5。以NSCLC为例，EGFR E20突变发生率为1.6％，约占EGFR突变9％，50％的EGFR-TKI耐药由EGFR E20的T790M点突变所致。因此通过检测EGFR基因有没有突变，可以筛选出抗EGFR(表皮生长因子受体)靶向药物治疗有效的肿瘤患者，实现肿瘤病人的个体化治疗，从而延长患者生存期。对于有突变的患者，则能减少不必要的治疗费用和毒副作用。

目前检测EGFR基因突变的检测试剂原料需多方配备，实验过程分步进行，耗时较长，容易污染，准确性不高，所以探索一种检测EGFR基因突变快速可靠的方法已经成为临床实验研究的热点问题。

实用新型内容

为了解决上述技术问题，本实用新型提供一种对石蜡组织的EGFR外显子基因突变检测试剂盒，包括：盒体1、盒盖2，盒体1内设置垫板3和隔离墙4，隔离墙4的一侧垫板上设置有PCR管5、EGFR18-p引物瓶6、EGFR19-p引物瓶7、EGFR20-p引物瓶8、EGFR20-p1引物瓶9、EGFR21-p引物瓶10、装酶混合物的试剂瓶11；隔离墙4的另一侧设置有去离子水瓶12、醋酸钠溶液瓶13、100％酒精瓶14、70％酒精瓶15。

将盒盖2盖住后，隔离墙4的两侧分别形成密闭空间，能防止试剂挥发等引起的污染，使得实验更准确。

所述引物的浓度为5μmol/L。所述引物序列和扩增片段大小如下表所示：

所述酶混合物包括浓度为0.4mmol/L的dNTPs，4mmol/L的Mg²⁺，2xBuffer，1.25U/25μl的HsTaq。

本实用新型与现有产品相比，具有如下积极有益的效果：

本试剂盒结构简单、设计合理、使用方便、检测过程不易受污染；本试剂盒在检测石蜡组织的EGFR外显子基因突变时具有敏感性高、特异性强、耗时短等优点；本试剂盒中设置的隔离墙，使得一个空间变为两个空间，能有效防止试剂挥发等引起的污染，使得实验更准确。

附图说明

图1为本实用新型的整体结构示意图。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本实用新型进行进一步说明。