[发明专利]利用时间分辨上转换发光检测技术进行磁性结合测定的方法

权利要求书

1.一种用于检测分析物在样品中是否存在及其含量的测定方法，其特征在于所述测定方法包括以下步骤：

（1）使含有所述分析物的样品与磁珠结合物、探针结合物接触，其中所述磁珠结合物为磁珠与第一特异性结合部连接形成，所述探针结合物为用来作为标记的检测探针与第二特异性结合部连接而成，所述检测探针在短于激发光波长的波长处发出发光寿命超过5μs的发光，所述第一特异性结合部和所述第二特异性结合部分别与所述分析物的不同表位特异性结合，形成夹心复合物；

（2）使用磁性装置将样品中磁性结合体与所述样品的其余部分分离，其中所述磁性结合体包括所述夹心复合物；

（3）使用在第一波长处的脉冲光源来激发所述分离的磁性结合体，从而在每次脉冲之后的一定延迟后，通过收集和测量在第二波长处的所述发光来获得检测信号，其中所述第二波长短于所述第一波长；

（4）将所述检测信号与校准曲线作比较，从而获得所述样品中所述分析物的数量，其中所述样品中所述分析物的数量与所述检测信号成正比。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述分析物选自蛋白质、肽、诸如细菌的微生物、病毒、酵母、DNA和RNA、酶、抗体和抗原。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述磁珠的大小从10nm至10μm，且与所述第一特异性结合部通过共价结合或物理吸附的方式连接。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述含有第一特异性结合部或第二特异性结合部的待测分析物包括抗体、抗原、DNA和RNA。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述检测探针包括镧系元素的螯合物、封装有所述镧系元素螯合物的颗粒、以及掺杂有所述镧系元素的磷光体纳米晶体颗粒，其中所述镧系元素选自钐、镝、铕、铽及其组合。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述检测探针吸收长波长的双光子，且发射一个较短波长的光子，其发射寿命从约20μs至2000μs。

7.根据权利要求1所述的方法，其中通过发光二极管、激光或钨灯来产生所述脉冲光源。

8.根据权利要求1所述的方法，其中通过硅光电二极管和光电倍增管来测量所述发光。

9.根据权利要求1所述的方法，其中所述脉冲光源和所述时间选通电路进行检测是通过定时电路来控制的。

10.根据权利要求1所述的方法，其中所述信号是在每个脉冲照射后延迟20μs至200μs时测量的。

11.一种用于检测分析物在样品中是否存在及其含量的测定方法，所述测定方法包括：

（1）使含有所述分析物的样品与磁珠结合物、探针结合物接触，其中所述磁珠结合物为磁珠与第一特异性结合部连接形成，所述探针结合物为用来作为标记的检测探针与分析物或分析物的类似物连接而成，所述检测探针在短于激发光波长的波长处发出发光寿命超过5μs的发光，所述第一特异性结合部和所述分析物或分析物的类似物特异性结合，形成夹心复合物；

（2）使用磁性装置将所述磁性结合体与所述样品的其余部分分离，其中所述磁性结合体包括所述夹心复合物；

（3）使用在第一波长处的脉冲照明来激发所述分离的磁性结合体，从而在每次脉冲之后的一定延迟后，通过收集和测量在第二波长处的所述发光来获得检测信号，其中所述第二波长短于所述第一波长；

（4）将所述检测信号与校准曲线作比较，从而获得所述样品中所述分析物的数量，其中所述样品中所述分析物的数量与所述检测信号成反比。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述分析物选自小分子、蛋白质、肽、诸如细菌的微生物、病毒、酵母、半抗原、酶、抗体和抗原。

13.根据权利要求11所述的方法，其中所述磁珠的大小从10nm至10μm，且与所述第一特异性结合部通过共价结合或物理吸附的方式连接。

14.根据权利要求11所述的方法，其中所述第一特异性结合部是抗体、抗原、DNA或RNA。

15.根据权利要求11所述的方法，其中所述检测探针选自所述镧系元素的螯合物、封装有所述镧系元素螯合物的颗粒、以及掺杂有所述镧系元素的磷光体纳米晶体颗粒，其中所述镧系元素是钐、镝、铕、铽或其组合。