[发明专利]一种微生物溶菌酶微胶囊及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及微生物制剂和水产养殖领域，具体为一种微生物溶菌酶微胶囊及制备方法和应用。

背景技术

现今，水产类食品遭受药物污染与危及人类健康的现象越来越严重，许多国家已明令禁止或限制抗生素等在饲料中的应用，因此，寻找天然安全的抗生素替代物是各国水产养殖业迫切需要解决的问题。

微生物溶菌酶是由微生物分泌产生的一种能溶解细菌细胞壁的酶，因其比卵清溶菌酶具有更高的生产率和更广泛的抑菌谱，近年来其在食品、医学、酶工程和饲料工业上倍受关注，因而将其作为水产养殖中抗生素替代物的思路是极具意义的，然而因其蛋白质结构易受胃肠道环境的降解而在口服制剂的运用中依然受到限制。

微胶囊技术是采用半透囊膜将物质包裹在囊内形成微胶囊，对芯材物质起保护及选择性释放的作用。其壁材有很多，海藻酸钠是从褐藻中提取的聚阴离子天然杂多糖，其溶液可与多价阳离子(如Ca²⁺)交联形成“蛋格”结构而瞬时凝胶化，此反应条件温和，成膜能力强且可降解性较好，因而海藻酸钠常被用作包埋药物、蛋白质或细胞的壁材。然而单独的海藻酸钠壁材结构稀疏，因此加入辅助壁材可增加包埋物稳定性，提高药物生物利用率，并且改变药物释放速率。壳聚糖是甲壳素经脱乙酰基后的产物，能溶于酸性溶液形成阳离子基团，易与带负电荷的海藻酸钠发生静电络合，使壁材膜更为致密坚固。此两者均资源丰富，价廉易得，相容性好，可生物降解，并均有报道具有免疫促进作用而适宜用于饲料添加剂。

截止目前，尚未有利用海藻酸钠/壳聚糖为壁材法制备微生物溶菌酶微胶囊的报道。

发明内容

本发明目的在于提供一种溶菌酶微胶囊。

本发明还提供了上述溶菌酶微胶囊的制备方法和应用。

本发明的溶菌酶微胶囊制备方法包括如下步骤：

（1）将海藻酸钠与溶菌酶的混合溶液滴加到含有壳聚糖和氯化钙的醋酸溶液中，并搅拌；滴加搅拌时间为10～90分钟，优选为20～50分钟；

优选的，所述海藻酸钠与溶菌酶的混合溶液中，海藻酸钠含量为0.01～0.03g/mL，溶菌酶的活性为5000～10000U/mL；

所述含有壳聚糖和氯化钙的醋酸溶液中，壳聚糖含量为0.001～0.006g/mL，氯化钙含量为0.01～0.04g/mL，醋酸的含量为1～5ml/L；所述壳聚糖的脱乙酰度为75%～95%；所述的海藻酸钠与壳聚糖的用量比为1：1～1：10；

（2）滴加完毕后固化0.5～4小时，取固体洗涤，得到溶菌酶/海藻酸钠/壳聚糖凝珠；优选的，固化时间为50～70分钟；

（3）溶菌酶/海藻酸钠/壳聚糖凝珠预冷冻后进行冷冻干燥；

所述预冷冻温度为-15～-25℃，预冻时间为6～24h；冷冻干燥的温度为-20～-28℃，压力为50～100Pa，时间为18～36h。

通过上述方法所制备的溶菌酶微胶囊，以海藻酸钠/壳聚糖为壁材，其中溶菌酶含量为20000～30000U/g。

上述溶菌酶微胶囊可用于制备鱼饲料，尤其是制备异育银鲫的饲料，用于异育银鲫的养殖。在异育银鲫的饲料中，以溶菌酶计，溶菌酶的含量为50000～250000U/kg。

微生物溶菌酶在经过饲料加工中的高温挤压和长期保存过程，以及喂食后被鱼体肠道消化环境的降解破坏而使得酶活损失率大，而达不到促进免疫、防病治病效果，本发明解决了上述技术问题。

本发明通过制备一种以海藻酸钠/壳聚糖为复合壁材的微生物溶菌酶微胶囊，添加于异育银鲫饲料，其优势在于：经过饲料加工过程的高温挤压后，依然较高地保留微生物溶菌酶的活性；在常温保存的过程中，微生物溶菌酶的稳定性可保持半年以上；饲喂养殖中，能经受水产动物胃中强酸和消化环境，在肠道中释放并发挥有效的促生长保健效果，长期服用可以代替或部分代替抗生素对一些致病菌引起的疾病进行防治，解决抗生素使用带来的抗药性和药物残留问题，也有望运用于食品防腐添加剂、医疗等领域。

具体实施方式

下面以具体例子对本发明进行说明。

实施例1

取100ml 40g/L的海藻酸钠溶液与100ml 2mg/mL溶菌酶溶液（溶菌酶的活性为5000U/mg）混合均匀，将上述混合溶液通过蠕动泵滴入到200ml含20g/L氯化钙和50g/L壳聚糖(脱乙酰度为90％）及5mL/L醋酸的水溶液中，并以180rpm的速度搅拌，蠕动泵滴加速度为100滴/min（约4～6mL/min）。