[发明专利]山葡萄黑龙江实生抗寒相关基因VaERD15的克隆

权利要求书

1.一种早期脱水应答基因ERD，其特征是编码山葡萄黑龙江实生（Vitisamurensis）早期脱水应答基因VaERD15的克隆与其表达载体： 

（1）克隆引物 

（2）目的基因 

（3）表达载体。 

2.根据权利要求1所述，其特征在于，RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends）克隆引物包括3’端引物，为VaERD-3:5’-GTTCGTTCCGTTGGCATATCGGACGGT’和5’端引物，为VaERD-5：5’-CTCAAACTACCAGGAAACCCTAACTCGC-3’。 

3.根据权利要求1所述，其特征在于，克隆引物还包括全长引物，为VaERD–F:5’-ATGGCTATGGAGGTAATTTCACGTAC-3’和VaERD–R:5’-TTACCGCGGCTGCTGAATCG-3’。 

4.根据权利要求1所述，其特征在于，目的基因全长685bp，开放阅读框（ORF）序列为423bp，内含子大小为88bp，编码140个氨基酸，其分子量为16.2kDa，pI为4.80。 

5.根据权利要求1-4所述，山葡萄黑龙江实生早期脱水应答基因VaERD15的核苷酸序列及编码的蛋白质序列： 

1GTCATTTTCGTTATCACAACCAGCTCGAACTTCTATCTTGAGATATTTTTTCAGCTTCTT 

61AGCGAAATGGCTATGGAGGTAATTTCACGTACAGCACCGTCATCGTCGACGTTGAATCCG 

M A M E V I S R T A P S S S T L N P 

121AACGCACCTTTGTTCGTTCCGTTGGCATATCGGACGGTGGAGGACTTTTCCGACCAATGG 

N A P L F V P L A Y R T V E D F S D Q W W 

181TGGGCCCTGGTACAGTCCTCTCCCTGGTTTCGCGATTACTGGCTTCAAGAATGCTTCCAA 

A L V Q S S P W F R D Y W L Q E C F Q D 

241GATCCCGAAACTGACCCTTAaagtagcgcttttccaatctattgactctctcagttccaa 

P E T D P Y 

301ctcgatacctcgtccgattcgattcagtttgtccttctttgtgcaggCTGTTACGATATT 

C Y D I 

361GACGATCCTGCCCTCCCCGACATCGACGCTCTCTTCGACGACTGCACCGGAAGCAAAGCG 

D D P A L P D I D A L F D D C T G S K A 

421GAGGAGGAGAAGGAGCATCAGAGGGAGTTGGTGTCGCTGGGGGCGTTGGTGGCGGAAGAC 

E E E K E H Q R E L V S L G A L K W R K 

481TCGAGATCCGGTGAAGTGACGCCTAGGCACTTCGAGAAGGCTCCGAAGATTGTGAACGTG 

T R D P V V T P R H F E K A P K I V N V 

541AAGGTGAGTCCGAGGCCGATTCAGCAGCCGCGGTAGAGCGACTCCGATGCTTGTGGCGTC 

K V S P R P I Q Q P R* 

601AATGAGTTCGAGGCCGGCGAGTTAGGGTTTCCTGGTAGTTTGAGTTTATTTGTGCTTTTT 

661TTTCCCTCTTTGAATGTGTACATAGAGATCACTCTAACTCGATGCATAGATCTTCAAAAT 

721CGCGGTCATGTTCTGTGTATGTGTTTTTAATAAATAAAATTTGTTCAAAACC。 

6.根据权利要求1所述，其特征在于，以pCAMBIA-3301基础引入BglⅡ和BstⅡ酶切位点，构建了pC3301/VaERD表达载体，可用于基因工程育种，以培育抗寒转基因植株。