[发明专利]一种利用喜树AOC基因转化提高烟草抗冻性能的方法

权利要求书

1. 一种分离出的DNA分子，具有编码丙二烯氧化物环化酶的核苷酸序列的核心片断，该核心片断来源于丙二烯氧化物环化酶基因的核苷酸序列，用引物SEQ ID NO:2 和SEQ ID NO:3，采用PCR法从喜树cDNA文库中扩增获得，喜树丙二烯氧化物环化酶基因的cDNA序列见SEQ ID NO：1，其全长1129bp，开放阅读框位置为第72位碱基到第812位碱基。

2. 一种高效表达载体，其特征在于它包含如权利要求1所述的DNA分子。

3. 一种用如权利要求2所述高效表达载体转化的宿主细胞。

4. 一种利用基因工程方法增强烟草抗冻性能的方法，其特征在于利用具有编码喜树丙二烯氧化物环化酶的核苷酸序列的植物表达载体，采用转基因方法在烟草细胞、组织、器官或植株中过量表达喜树丙二烯氧化物环化酶基因的DNA分子；其具体步骤如下：

（1）采用基因克隆或人工合成基因方法获得喜树丙二烯氧化物环化酶基因的片断；

（2）把喜树丙二烯氧化物环化酶基因片断连于表达调控序列，形成植物高效表达载体；

（3）采用转基因方法转移喜树丙二烯氧化物环化酶基因片断到烟草的细胞、组织、器官或植株中；

（4）筛选和鉴定转化子；

（5）培养转化子，获得转基因后代；

（6）测定转基因后代的抗冻性能。