[发明专利]一种闹羊花毒素Ⅲ单体的分离纯化方法

权利要求书

1.一种闹羊花毒素Ⅲ单体的分离纯化方法，其特征在于：以杜鹃花科植物羊踯躅药材为原料，通过提取、萃取、制备液相系统分离及干燥得闹羊花毒素Ⅲ单体，具体包括如下工艺步骤：

A 提取

将干燥的羊踯躅药材粉碎成1～4mm的粗粉，加入醇溶液，于60～100℃提取3～5次，每次1～3小时，提取液过滤，合并过滤液，60～90℃浓缩回收乙醇，得相对密度1.0～1.1的浓浸膏；

B 萃取总毒素

将步骤A所得的浓浸膏加水稀释至60℃时相对密度为0.7～0.9g/mL，然后加入等体积的乙酸乙酯萃取3～5次，分取上层溶液，45～60℃减压浓缩至干，所得固体物用质量/体积=10～15的甲醇超声溶解，并用0.45μm有机膜过滤，得澄清溶液；

C 通过制备型高效液相色谱分离闹羊花毒素Ⅲ单体

取步骤B所得的滤液进样，进行闹羊花毒素Ⅲ单体的制备分离，紫外检测器在线监测针对性收集闹羊花毒素Ⅲ的制备馏分溶液，得闹羊花毒素Ⅲ单体溶液；

D 干燥制备闹羊花毒素Ⅲ单体产品

取步骤D所得闹羊花毒素Ⅲ单体溶液，于45℃～75℃减压浓缩至干，再将固体物于45～85℃与另器盛放的五氧化二磷共存，真空干燥至恒重，收集干品，即得闹羊花毒素Ⅲ单体产品。

2.如权利要求1所述闹羊花毒素Ⅲ单体的分离纯化方法，其特征在于：步骤A所述醇溶液为甲醇或乙醇溶液，它们的浓度均为G/G=70～90%。

3.如权利要求1或2所述闹羊花毒素Ⅲ单体的分离纯化方法，其特征在于：步骤A所述醇溶液的加入量为药材重量:醇溶液体积=1Kg:(6～10)L。

4.如权利要求1所述闹羊花毒素Ⅲ单体的分离纯化方法，其特征在于：步骤C所述制备型高效液相色谱采用填料为C₁₈的色谱柱、流动相组成为：体积分数65～85%的甲醇水溶液。

5.如权利要求1所述闹羊花毒素Ⅲ单体的分离纯化方法，其特征在于：步骤C所述紫外检测器检测波长为210nm。

6.如权利要求1所述闹羊花毒素Ⅲ单体的分离纯化方法，其特征在于：步骤C所述制备型高效液相色谱分离前，通过液-质联用方法或气-质联用、核磁共振碳谱、氢谱方法确定高效液相色谱中闹羊花毒素Ⅲ单体的峰形。

7.如权利要求1或6所述闹羊花毒素Ⅲ单体的分离纯化方法，其特征在于所述液-质联用方法，采用填料为C₁₈的色谱柱，流动相组成为：体积分数65～85%的甲醇水溶液，柱温为室温，检测波长为210nm，根据质谱正离子检测结果，确定闹羊花毒素Ⅲ单体在液相色谱中所对应的峰形及归属。