[发明专利]日本脑炎病毒SA14-14-2株基于DNA的感染性克隆、其构建方法及应用

权利要求书

1.日本脑炎病毒SA14-14-2株基于DNA的感染性克隆，其特征在于，所述感染性克隆以pBR322质粒为骨架载体，通过插入日本脑炎病毒SA14-14-2疫苗株的全长cDNA获得，所述SA14-14-2疫苗株全长cDNA的5′端连接CMV启动子，3′端添加BGH多聚腺苷酸化序列，且在基因组cDNA的第356位点和第2217位点上分别添加一段用于起稳定作用的嵌合内含子序列。

2.根据权利要求1所述的感染性克隆，其核苷酸序列如SEQ ID No：1所示。

3.一种构建权利要求1或2所述感染性克隆的方法，其特征在于，通过分段RT-PCR法获得日本脑炎病毒SA14-14-2疫苗株的全长基因组cDNA序列，然后在基因组cDNA序列5′端连接CMV启动子，3′端添加BGH多聚腺苷酸化序列，并在基因组cDNA的第356位点和第2217位点上分别添加一段用于起稳定作用的嵌合内含子序列，最终克隆到质粒pBR322中。

4.权利要求1或2所述感染性克隆在作为新型病毒载体中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，将日本脑炎病毒SA14-14-2疫苗株全长基因组cDNA序列中编码前膜蛋白和包膜蛋白的核苷酸序列替代成编码另一种病毒前膜蛋白和包膜蛋白的核苷酸序列，或直接将外源基因插入到SA14-14-2株cDNA序列的3′-UTR区，从而构建一种嵌合型的感染性克隆载体。

6.一种嵌合型的感染性克隆载体，其特征在于，以权利要求1或2所述感染性克隆为出发载体，将日本脑炎病毒SA14-14-2疫苗株全长基因组cDNA序列中编码前膜蛋白和包膜蛋白的核苷酸序列替代成编码另一种病毒前膜蛋白和包膜蛋白的核苷酸序列，或直接将外源基因插入到SA14-14-2株cDNA序列的3′-UTR区，即得。

7.根据权利要求6所述嵌合型的感染性克隆载体，其特征在于，另一种病毒任选西尼罗脑炎病毒、登革1-4病毒、黄热病毒、圣路易脑炎病毒、蜱传脑炎病毒或丙型肝炎病毒中的一种。

8.制备日本脑炎病毒SA14-14-2株的拯救病毒的方法，其特征在于，用权利要求1或2所述的感染性克隆转染日本脑炎病毒易感细胞或直接接种易感动物，获得拯救病毒。

9.权利要求6或7所述嵌合型的感染性克隆载体在制备嵌合型病毒及其衍生物中的应用，其特征在于，用所述嵌合型的感染性克隆载体转染易感细胞或直接接种易感动物，拯救获得嵌合型病毒及其衍生物。

10.权利要求1或2所述日本脑炎病毒SA14-14-2株基于DNA的感染性克隆以及权利要求6或7所述嵌合型的感染性克隆载体在制备抗病毒和预防肿瘤的药物及疫苗中的应用。