[发明专利]新科罗索酸衍生物、其制备方法及其在制备糖尿病药物中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及天然药物化学及医药技术领域，包括从新月旋孢腔菌转化科罗索酸后得到的新科罗索酸衍生物的提取分离方法，结构鉴定及其对α-葡萄糖苷酶活性抑制作用。 

背景技术

科罗索酸是一种乌苏烷型五环三萜类化合物，存在于大叶紫薇、枇杷和山楂等植物中。近年来研究发现，科罗索酸具有降血糖、减肥、抗肿瘤、抗炎、抗病毒和抗心血管疾病等作用，尤其是有较好的降血糖活性，具有类似胰岛素的生理作用，被称为“植物胰岛素”，受到人们广泛关注。α-葡萄糖苷酶抑制剂可抑制小肠内α-葡萄糖苷酶的活性，延缓或抑制葡萄糖在肠道的吸收，从而有效防治餐后高血糖症和缓解高胰岛素血症，同时可以提高糖耐量，从而可达到防治糖尿病及其并发症发生的目的。 

发明内容

本发明的目的在于通过新月旋孢腔菌对科罗索酸进行结构修饰得到新化合物，并研究新化合物对α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用。 

本发明是通过以下技术方案完成的，具体内容包括：微生物转化科罗索酸，2种转化产物的提取分离，结构鉴定和α-葡萄糖苷酶活性的测定。 

(1)微生物转化科罗索酸 

本发明采用微生物新月旋孢腔菌Cochliobolus lunatus R.R.Nelson&Haasis CGMCC3.4381对底物科罗索酸在适宜条件下进行转化。本发明所述的新月旋孢腔菌Cochlioboluslunatus R.R.Nelson&Haasis CGMCC 3.4381可以从中国普通微生物菌种保藏管理中心获得。 

(2)转化产物提取分离 

本发明采用乙酸乙酯对微生物发酵液进行萃取得到菌液提取物，采用乙酸乙酯提取菌丝中的产物，二者合并后进行硅胶柱分离，采用不同比例的石油醚-四氢呋喃进行梯度洗脱，将洗脱液分别减压浓缩、干燥，分别得到2种新化合物的提取物。将2种提取物进行反复硅胶柱层析，并用Sephadex LH-20或者HPLC制备纯化，最终得到2个新化合物。 

具体实施方式

现结合实施例对本发明做进一步说明，但本发明的内容并不局限于例举的实施例。 

实施例1. 

新化合物1和2的提取与分离 

本发明采用乙酸乙酯对微生物发酵液进行萃取得到菌液粗提物，采用乙酸乙酯超声提取 菌丝中的产物，二者合并后进行硅胶柱分离，采用不同比例的石油醚-四氢呋喃进行洗脱，将洗脱液分别减压浓缩、干燥，得到新化合物1和2的提取物。提取物经过Sephadex LH-20凝胶柱无水乙醇洗脱和高效液相色谱制备(甲醇∶水＝65∶35等度洗脱)分离得到新化合物1和2。 

实施例2 

新化合物1结构鉴定 

新化合物1为白色粉末，由HR-ESI-MS([M-H]^-：487.3451)可知，化学式为C₃₀H₄₈O₅

¹H-NMR(Pyridine-d₅，500MHz)谱中，显示该化合物有7个甲基氢信号，为三萜化合物角甲基特征信号分别为：δ0.99(3H，s，25-CH₃)、δ1.06(3H，s，26-CH₃)、δ1.09(6H，o，24-CH₃)、δ1.09(3H，o，29-CH₃)、δ1.23(3H，s，27-CH₃)、δ1.29(3H，s，23-CH₃)、δ1.41(3H，d，30-CH₃)；低场处有一氢信号δ5.51(brs)，推测为双键上的氢。从¹³C-NMR(Pyridine-d₅，500MHz)谱中可知该化合物有30个碳原子信号，其中3个碳原子为连氧碳原子信号，对比科罗索酸的谱图特征，推断为羟基碳信号。化合物含有一组双键碳信号δ126.6和δ139.7；有一个羧基碳原子信号δ179.7，综上信息可以判断该化合物为乌苏烷型五环三萜类化合物。结合HSQC谱和HMBC谱对化合物1中碳、氢原子的化学位移进行了归属(表1)。