[发明专利]乳杆菌冻干产品及其制备方法

权利要求书

1.嗜酸乳杆菌、副干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌冻干产品的制备方法，按以下步骤进行：

一、高密度培养

将按常规方法活化的嗜酸乳杆菌、副干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌以2%的接种量接种于灭菌的培养基中进行发酵；发酵过程中pH采用两段式，总发酵时间10h，第一阶段将发酵液的pH用质量浓度10%的氨水控制在6.0-6.5，发酵7.0h；第二阶段不控制发酵液的pH，发酵3.0h；发酵过程中采用三段式变温培养模式，第一阶段将发酵温度控制在42.5-45.0℃，发酵3.5h；第二阶段将发酵温度控制在35-37℃，发酵3.5h；第三阶段将发酵温度控制在37-40℃，发酵3h；其中所述培养基为：80-120g的脱脂乳粉，50-70g的甜菜糖蜜，40-60g的玉米淀粉糖浆、0.50-0.70g的酵母膏或酵母粉、12mg的尿嘧啶和黄嘌呤、0.005mg的生物素和叶酸、2.0mg的尼克酸和泛酸钙、2.0mg的核黄素、1.0mg盐酸硫胺素、0.01g的甲酸、20g的乳糖和50g的麦芽汁加入蒸馏水并定容至1000mL；在发酵过程中搅拌速度为120rpm，直至发酵结束；其中，尿嘧啶和黄嘌呤的比例为1：2；生物素和叶酸的比例为1：1；尼克酸和泛酸钙的比例为1：3；

二、洗脱

三、富集

四、冻干保护

将获得的菌体浓缩物与冻干保护剂以质量比为1：1-1：2进行混合，然后进行冷贮；其中冻干保护剂的组成：将150g的脱脂乳粉、20g的斯盘60、80g的海藻糖、50g的蔗糖糖蜜和15g的维生素C加入蒸馏水并定容至1000mL；将此混合物在4-15℃的环境中放置20h；

五、菌体的干燥

将步骤四得到的混合物以2℃/min的降温速率降至-50℃，保持30min；在真空度为0.05MPa的条件下，以1℃/min的速率升温至-35℃，并维持此温度至真空度达到0.01MPa完成主干燥阶段；以5℃/min的速率升温至10℃并维持此温度至真空度达到0.03MPa完成解析干燥阶段，取出后用颗粒机粉碎，再用无菌铝箔纸盒包装并置于-20℃的环境中贮藏。

2.根据权利要求1所述的方法，其中的所述的洗脱步骤具体为：发酵液在0～20℃时，加入与发酵液等重量的质量浓度为15%的柠檬酸钠溶液或质量浓度为15%的磷酸钠溶液对发酵液进行蛋白洗脱。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述的富集步骤具体为：洗脱结束后，将发酵液的温度降至4℃，依次采用膜过滤、连续式离心进行浓缩，具体膜浓缩操作为：用孔径为100～200nm、面积为1.0m²的陶瓷膜，在跨膜压力为150KPa进行膜浓缩处理，至发酵液的浓缩倍数达到3；离心浓缩具体为：以30kg/min的进料量用连续自动出料式离心机进行离心浓缩，控制出料量为5kg/min。