[发明专利]一种具有高油酸性状油菜的早期育种方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种具有高油酸性状油菜的早期育种方法。

背景技术

油菜是重要的油料和蜜源作物，中国菜籽油产量占全国食用植物油总产量的60%以上，是国产食用植物油第一大来源。菜籽油富含油酸，其油酸含量大于80%的菜籽油营养品质可与橄榄油媲美，菜籽油也是生物柴油的重要原料，是环保型的可再生型能源，所以提高油酸含量已成为油菜品质改良的重要目标之一。目前油菜品质育种时，通常用收获的成熟种子检测油酸的含量，即油菜种植后，待次年油菜开花时进行大量套袋自交，等种子成熟时，剪下套袋自交的种子，用气相色谱测定油酸含量，从而淘汰油酸含量低的材料，优选油酸含量高的材料。油菜是异花授粉作物，为确保检测材料不受外来花粉污染，需要在花期进行套袋自交，由于材料油酸含量的不确定，造成了套袋材料选择的盲目性，大量套袋浪费了巨大的人力物力，而且通过成熟种子油酸含量的高低来选种，延缓了育种进程，降低了育种的效率。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术存在的缺陷，提供一种具有高油酸性状油菜的早期育种方法。

实现本发明目的的技术方案是：一种具有高油酸性状油菜的早期育种方法，包括以下步骤：

（1）材料种植；

（2）样品制备；

（3）样品前处理；

（4）样品分析；

（5）材料筛选。

作为优化，所述各步骤分别如下：

（1）材料种植：油菜正常播种；

（2）样品制备：在油菜开花前的任意一个生育时期，取同一部位功能叶片，洗净擦干，放入干燥箱烘至恒重，用高速万能粉碎机粉碎；

（3）样品前处理：称取叶粉于离心管中, 加石油醚，在超声波条件下浸提，再加入活性炭，涡旋混匀后高速离心，吸取全部上清液于离心管中，加入氢氧化钾的甲醇溶液，涡旋混匀后静置，沿管壁再加入蒸馏水悬浮，静置后吸取悬浮上清液于微量瓶中，将微量瓶放置于样品瓶中，准备进行气相色谱分析；

（4）样品分析：用气相色谱仪进行色谱分析，分析条件为进样口采用恒压模式，FID检测器，温度为300℃，载气为99.999％的纯氮，面积归一化处理气相色谱谱图，获得油酸含量；

（5）材料筛选：根据叶片油酸含量的多少，对叶片油酸含量低的材料进行淘汰，对叶片油酸含量中等的材料，在花期少量套袋自交，对叶片油酸含量高的材料，在花期全部套袋自交，从而获得高油酸材料。

作为优化，所述各步骤分别如下：

（1）材料种植：油菜正常播种，每种材料20行，齐苗后每行留苗20株。

（2）样品制备：在油菜开花前的任意一个生育时期，都选取同一部位功能叶片2张，洗净擦干，放入电热恒温鼓风干燥箱内，先杀青，温度105℃，时间30 min，再降温到80℃烘干至恒重，用高速万能粉碎机粉碎，过80目筛；

（3）样品前处理：称取叶粉0.2g于10ml 离心管中, 加沸程为60-90℃的石油醚2ml, 在45℃、50KHz的超声波条件下浸提30 min，加入20mg活性炭，涡旋混匀后高速离心5min，离心力为8000×g，吸取全部上清液于5ml离心管中，加入0.5ml 的0.4mol/L氢氧化钾的甲醇溶液，涡旋混匀后静置1h，沿管壁再加入2ml蒸馏水悬浮，静置0.5h，吸取悬浮上清液于250μl微量瓶中，将微量瓶放置在2.5ml的样品瓶中，准备进行气相色谱分析；

（4）样品分析：用安捷伦7890气相色谱仪进行色谱分析，色谱柱为15.0m×250μm×0.25μm，自动进样，进样口温度为250℃，进样量为2μl，分流比为5：1，进样口采用恒压模式，压力为70.74Kpa，流速30ml/min，隔垫吹扫流量为3.00ml/min，FID检测器，温度为300℃，载气为99.999％的高纯氮，尾吹气流量为30.00ml/min，色谱分析时，色谱柱流量为1.0 ml/min，程序升温，180℃保留1.0min，5℃/min升温至215℃，215℃保留1.0min ，3℃/min 升温至230℃，230℃保留1min，面积归一化处理气相色谱谱图，获得油酸的相对含量；

（5）材料筛选：根据叶片油酸含量的多少，对叶片油酸含量低于2.00%的材料进行淘汰，对叶片油酸含量为2.00%~4.00%的材料，在花期少量套袋自交，对叶片油酸含量高于4.00%的材料，在花期全部套袋自交，从而获得高油酸材料。

作为优化，所述步骤（1）材料种植可以采用移栽的方式培育材料。