[发明专利]一种具有高油酸性状油菜的早期育种方法

权利要求书

1.一种具有高油酸性状油菜的早期育种方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）材料种植；

（2）样品制备；

（3）样品前处理；

（4）样品分析；

（5）材料筛选。

2.根据权利要求1所述的一种具有高油酸性状油菜的早期育种方法，其特征在于：所述各步骤分别如下：

（1）材料种植：油菜正常播种；

（2）样品制备：在油菜开花前的任意一个生育时期，取同一部位功能叶片，洗净擦干，放入干燥箱烘至恒重，用高速万能粉碎机粉碎；

（3）样品前处理：称取叶粉于离心管中, 加石油醚，在超声波条件下浸提，再加入活性炭，涡旋混匀后高速离心，吸取全部上清液于离心管中，加入氢氧化钾的甲醇溶液，涡旋混匀后静置，沿管壁再加入蒸馏水悬浮，静置后吸取悬浮上清液于微量瓶中，将微量瓶放置于样品瓶中，准备进行气相色谱分析；

（4）样品分析：用气相色谱仪进行色谱分析，分析条件为进样口采用恒压模式，FID检测器，温度为300℃，载气为99.999％的纯氮，面积归一化处理气相色谱谱图，获得油酸含量；

（5）材料筛选：根据叶片油酸含量的多少，对叶片油酸含量低的材料进行淘汰，对叶片油酸含量中等的材料，在花期少量套袋自交，对叶片油酸含量高的材料，在花期全部套袋自交，从而获得高油酸材料。

3.根据权利要求2所述的一种具有高油酸性状油菜的早期育种方法，其特征在于：所述各步骤分别如下：

（1）材料种植：油菜正常播种，每种材料20行，齐苗后每行留苗20株。

（2）样品制备：在油菜开花前的任意一个生育时期，都选取同一部位功能叶片2张，洗净擦干，放入电热恒温鼓风干燥箱内，先杀青，温度105℃，时间30 min，再降温到80℃烘干至恒重，用高速万能粉碎机粉碎，过80目筛；

（3）样品前处理：称取叶粉0.2g于10ml 离心管中, 加沸程为60-90℃的石油醚2ml, 在45℃、50KHz的超声波条件下浸提30 min，加入20mg活性炭，涡旋混匀后高速离心5min，离心力为8000×g，吸取全部上清液于5ml离心管中，加入0.5ml 的0.4mol/L氢氧化钾的甲醇溶液，涡旋混匀后静置1h，沿管壁再加入2ml蒸馏水悬浮，静置0.5h，吸取悬浮上清液于250μl微量瓶中，将微量瓶放置在2.5ml的样品瓶中，准备进行气相色谱分析；

（4）样品分析：用安捷伦7890气相色谱仪进行色谱分析，色谱柱为15.0m×250μm×0.25μm，自动进样，进样口温度为250℃，进样量为2μl，分流比为5：1，进样口采用恒压模式，压力为70.74Kpa，流速30ml/min，隔垫吹扫流量为3.00ml/min，FID检测器，温度为300℃，载气为99.999％的高纯氮，尾吹气流量为30.00ml/min，色谱分析时，色谱柱流量为1.0 ml/min，程序升温，180℃保留1.0min，5℃/min升温至215℃，215℃保留1.0min ，3℃/min 升温至230℃，230℃保留1min，面积归一化处理气相色谱谱图，获得油酸的相对含量；

（5）材料筛选：根据叶片油酸含量的多少，对叶片油酸含量低于2.00%的材料进行淘汰，对叶片油酸含量为2.00%~4.00%的材料，在花期少量套袋自交，对叶片油酸含量高于4.00%的材料，在花期全部套袋自交，从而获得高油酸材料。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的一种具有高油酸性状油菜的早期育种方法，其特征在于：所述步骤（1）材料种植可以采用移栽的方式培育材料。

5.根据权利要求1至3中任一项所述的一种具有高油酸性状油菜的早期育种方法，其特征在于：所述步骤（2）样品制备中油菜取样的时期分为油菜出苗后的苗期、越冬期、返青期、蕾薹期和花期。

6.根据权利要求5所述的一种具有高油酸性状油菜的早期育种方法，其特征在于：所述步骤（2）样品制备中油菜取样时间优选在油菜出苗后70天~77天的苗期、104天~114天的越冬期、134天~141天的返青期、163天~170天的蕾薹期和180天~187天的花期。