[发明专利]TCRP1基因在制备肿瘤细胞铂类耐药逆转剂中的应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地讲，涉及TCRP1基因在制备肿瘤细胞铂类耐药逆转剂中的新用途。

背景技术

自1967年发现顺铂(cisplatin )具有抗肿瘤活性以来，铂类金属抗肿瘤药物的合成、应用和研究得到了迅速的发展，目前其发展已经历了三代：顺铂、卡铂和奥沙利铂。凭借其良好的疗效，铂类药物已被广泛应用于多种恶性实体肿瘤的一线治疗，如：卵巢癌、前列腺癌、睾丸癌、肺癌、结肠癌、鼻咽癌等头颈部实体瘤，成为癌症化疗不可或缺的药物。据统计，在中国以铂类药物为主或有其参加配伍的化疗方案占所有化疗方案的70%-80%。但肿瘤细胞对铂类药物耐药性的产生常使化疗难以奏效并最终导致化疗失败。因此研究铂类药物耐药分子机制及寻找逆转耐药的靶点已成为目前肿瘤治疗研究中的一个焦点。

肿瘤铂类耐药的产生是一个多因素参与的复杂过程，其耐药机制尚需进一步阐明。目前认为耐药的主要机制有：1. 胞内药物蓄积减少。包括胞内药物摄取减少和药物排出增多。如与摄取铂类药物相关的膜蛋白CTR1(copper transporter 1)的表达降低；与药物排出相关的多药耐药蛋白，MDR、MRP2、ATP7A/7B等表达增高。2.活化减少，失活增加。一些内生的亲核物质，如谷胱甘肽，蛋氨酸和金属硫蛋白能与铂类药物结合导致其在体内失活。3. DNA修复能力增强。如DNA修复系统蛋白ERCC1、BRCA1/BRCA2的活性与铂类药物敏感性负相关。4.铂类药物对细胞损伤能力减弱。如p53基因的突变，导致细胞凋亡抑制，存活能力增强。5. DNA甲基化以及信号传导通路异常等。

TCRP1 (Tongue Cancer Resistance-associated Protein 1 ) 基因是本课题组前期在分析自主建立的多药耐药细胞株人舌鳞癌细胞Tca8113/PYM（对平阳霉素、顺铂、奥沙利铂等耐药，耐药指数RI>18）与其亲本敏感细胞株Tca8113的cDNA 芯片结果时，得到一个新的EST 序列。通过利用生物信息学分析技术，申请人对这一个EST序列(GenBank ID: AL707095; UniGene Cluster ID:Hs475334)进行Blast 延伸拼接分析，结合PCR扩增，得到一个全长cDNA序列，命名为TCRP1基因（NCBI提交号: EF363480）。

TCRP1基因位于人类染色体11q13.4（NCBI Human Genome Project database, Build37.3）也命名为FAM168A或者KIAA0280。其于1996被日本Kazusa DNA Research Institute 报道为预测基因，命名为KIAA0280， 但生物学功能一直不明。TCRP1 在NCBI Build 37.3 中确定其mRNA全长为1834bp，共8个外显子，预测可转录编码235个氨基酸。

发明内容

本发明的目的是提供TCRP1基因作为肿瘤细胞铂类耐药逆转剂的新的应用，为肿瘤耐药机制提供新的资料，并且为抗肿瘤耐药药物的设计和筛选提供了新的靶点。

具体的讲，我们利用RT-PCR和Western blot 发现TCRP1在多种继发性铂类耐药细胞株（A549/DDP、COC1/DDP、Tca8113/PYM）表达相对于其亲本敏感细胞株升高，在肺癌原发性铂类耐药细胞株95D中也明显高于其他铂类敏感肺癌细胞株。

进一步，我们发现利用siRNA干扰技术，通过降低TCRP1的表达水平可逆转继发性和原发性耐药细胞株对铂类药物的反应，增强其对铂类药物（顺铂、奥沙利铂）的敏感性。因此首次提出TCRP1基因是肿瘤细胞耐药相关基因，主要为铂类耐药相关基因。另外TCRP1的siRNAs 分子可作为肿瘤细胞铂类耐药逆转剂，在逆转肿瘤铂类耐药性中发挥重要作用。

此外本发明还涉及该核酸分子TCRP1的抗体制备，包含TCRP1核酸分子的重组表达载体。

发明保护了TCRP1基因在制备肿瘤细胞铂类耐药逆转剂中的应用，所述的TCRP1基因的序列如SEQ ID NO:1所示；

以及TCRP1多肽在制备肿瘤细胞铂类耐药逆转剂中的应用，所述的TCRP1多肽的序列如SEQ ID NO:2所示；

以及TCRP1基因抑制剂在制备肿瘤细胞铂类耐药逆转剂中的应用；

以及TCRP1基因的干扰siRNAs在制备肿瘤细胞铂类耐药逆转剂中的应用。上述的干扰siRNAs的核苷酸序列如SEQ ID NO:3。

上述的逆转剂为原发性肿瘤细胞铂类耐药逆转剂或继发性肿瘤细胞铂类耐药逆转剂。