[发明专利]一种用于癌症检测的标志物及应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种癌症检测的分子标识和技术方法，在医学遗传学以及临床诊断领域具有广泛的应用前景。 

背景技术

1. 癌症分子标记 

人体正常细胞经过一系列基因突变，最终摆脱细胞正常生长调控而癌变。这些突变涉及到染色体易位、基因扩增、基因缺失、点突变等。癌症组织遗传学改变，最终会导致癌症个体中某些基因mRNA和蛋白的差异表达。因此尽管对于这些遗传学改变功能不明确，我们仍可通过基因的mRNA和蛋白表达水平的差异来获得癌症组织的生物学信息。

癌症分子标记物是在癌症患者的血液，尿液，淋巴液，唾液，肿瘤实体或者其他组织中特异表达的基因产物(McShane and Altman 2005)。癌症标记物可能由癌细胞产生，也可能由正常细胞产生。虽然大多数的癌症分子标记物的最终产物是蛋白质，但是DNA，mRNA和蛋白分子的变化都可以用作癌症分子标记的检测。在临床上癌症分子标记物常常用于癌症的早期诊断，中期分期以及辅助治疗。到目前为止，有超过20种的癌症标记物用于临床。常见的有，Alpha-fetoprotein (AFP)检测肝癌和精原细胞瘤， BRAF mutation V600E检测结肠癌，CA15-3/CA27.29检测乳腺癌，CA-125检测卵巢癌，Calcitonin检测前列腺癌，Cytokeratin  fragments 21-1检测肺癌，Fibrin/fibrinogen检测膀胱癌，CD20检测淋巴癌等。 

现阶段，癌症分子标记的局限在于 

1)      有的时候非癌症的内环境也可能产生癌症分子标记物，对诊断结果造成影响。

2)      并不是每一个患同种类型癌症的个体都伴随该类型癌症分子标记物的高水平表达。 

3)      某些类型的癌症缺少相应的分子标记物。 

4)      至今没有一种癌症分子标记物可以检测所有类型的癌症。 

2. RT-PCR检测mRNA表达 

RT-PCR可以精确地反映受检基因在癌症组织中的mRNA表达水平，从而能精确地评估癌症的相关信息。RT-PCR目前已广泛应用于临床实践。相对于蛋白水平的免疫印迹（Western blot）而言，RT-PCR体现出的是体内相关基因的mRNA表达量的信息，检测灵敏度和准确性都比较高，并且所需时间和成本较低。

3. 免疫印迹（ Western blot）测定蛋白表达 

免疫印迹（Western Blot）中，经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。随后固相载体上的蛋白质作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶标记的第二抗体起反应，经过底物显色或自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术广泛应用于检测癌症中特定蛋白水平的表达。

4. 免疫荧光（Immunofluorescence）检测蛋白表达 

为了检测癌症组织中蛋白表达水平和表达部位，目前临床上可以采用免疫荧光的技术。免疫荧光是利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过荧光标记的二抗显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量分析。

发明内容

本发明的目的是提供一种新型的用于癌症检测的标志物； 

本发明的另一个目的是提供一种用于癌症检测的试剂组合。

本发明首次发现Nurim是一种新型的内层核膜蛋白（见图1）， 在多数正常组织中不表达，在早期肿瘤中低表达，随着肿瘤的恶化Nurim一直保持高水平的表达。而在肿瘤晚期，Nurim不仅存在于细胞核膜，在细胞质和细胞核中也可以观察到Nurim的表达。Nurim对维持细胞内层核膜的完整性起着非常重要的作用。同时，干涉Nurim可以大大提高UV诱导的细胞凋亡，提示Nurim可能具有抑制凋亡的功能（见图2）。 

据此，为实现上述目的，本发明提供一种用于癌症检测的标志物，其为Nurim基因的mRNA或其表达产物。 

Nurim基因有三个转录本，包括Nurim a，Nurim b和Nurim c，其核酸序列如SEQ ID No.5~7所示。