[发明专利]一种18O在线标记的蛋白质定量分析平台及其操作方法

权利要求书

1.一种¹⁸O在线标记的蛋白质定量分析平台，其特征在于：

¹⁸O在线标记的蛋白质定量分析平台的构建：进样针（2）与注射泵（1）传动连接，由注射泵（1）驱动进样针（2）向酶反应器（4）内进样；酶反应器（4）置于一柱温箱（3）内，酶反应器（4）的样口入口与进样针（2）相连，酶反应器（4）的样口出口接第一四通或六通阀（5）的第一接口；二台液相色谱泵（9）的物料入口分别与两个流动相储罐相连，二台液相色谱泵（9）的物料出口分别与一个混合器的入口相连，混合器的出口接第一四通或六通阀（5）的第二接口；肽段捕集柱（6）入口端与三通的第一接口相连，三通的第二接口与第一四通或六通阀（5）的第三接口相连，三通的第三接口与第二四通或六通阀（8）的第一接口相连；第一四通或六通阀（5）的第四接口接废液收集容器；肽段捕集柱（6）的出口端与四通的第一接口相连，四通的第二接口与第二四通或六通阀（8）的第二接口相连，第二四通或六通阀（8）的第三接口和第四接口接废液收集容器；四通的第三接口接高压加电金属针；四通的第四接口与多肽分离柱（7）的入口端相连，多肽分离柱（7）的出口端与质谱检测器（10）的进样口相连。

2.按照权利要求1所述的¹⁸O在线标记的蛋白质定量分析平台，其特征在于：

所述¹⁸O在线标记的蛋白质定量分析平台将蛋白酶解部件、¹⁸O在线标记、多肽分离部件、检测器集成化。

3.按照权利要求1所述的¹⁸O在线标记的蛋白质定量分析平台，其特征在于：

酶反应器是实现¹⁸O在线标记的关键部件，能够在酶解的同时对酶解后的肽段进行高效的¹⁸O标记；制备酶反应器的材料可以为有机基质的整体材料，有机-无机杂化的整体材料，有机基质的颗粒材料；制备酶反应器所固载的酶的种类为：丝氨酸蛋白酶。

4.一种权利要求1所述¹⁸O在线标记的蛋白质定量分析平台的操作方法，其特征在于：

操作方法如下：通过注射泵（1）调节流速，将进样针（2）中的蛋白样品注射进入酶反应器（4）中，酶反应器（4）被放置在柱温箱（3）中，停留孵育45min至90min后，将酶反应器（4）中酶解后的肽段通过第一四通或六通阀（5）注入到捕集柱（6）上，切换第一四通或六通阀（5）和第二四通或六通阀（8），捕集柱（6）上的肽段样品将被液相色谱泵（9）流动相带入多肽分离柱（7）中进行进一步分离，最后通过质谱检测器（10）进行分析。

5.按照权利要求4所述的操作方法，其特征在于：¹⁸O在线酶促标记时，样品溶于NH₄HCO₃溶液中，其浓度范围为20mM至100mM；¹⁸O在线酶促标记时，反应温度可设定为25℃至40℃；¹⁸O在线酶促标记时，酶促标记的时间为45min至90min。