[发明专利]单分散聚甲基丙烯酸酯强阳离子交换层析介质在胸腺五肽纯化中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及药物纯化领域，特别是一种胸腺五肽的纯化方法。

背景技术

胸腺五肽( Thymopent in, TP5)是促胸腺生成素32~ 36上5个氨基酸组成的小肽，TP5的分子式是C₃₀H₄₉N₉O₉ ，相对分子质量679.41，等电点是9.9，化学式是：NH2 - Arg - Lys - Asp - Val - Tyr – OH，它保留了胸腺生成素的有效生物活性，有调节和增强人体细胞免疫功能的作用，临床上主要用于治疗肿瘤、单纯疱疹、类风湿性关节炎、艾滋病、严重免疫缺陷综合症、慢性乙型肝炎等，其注射用药剂是目前世界上处方量处于第一位的免疫调节剂。胸腺五肽在医用上良好的产业前景使得人们将注意力纷纷集中在大规模生产上，由于其分子式简单的特点使固相化学合成法独具优势，成为获得胸腺五肽的重要途径，目前报道的胸腺五肽后期纯化方法主要集中在使用反相层析及离子交换。

南京工业大学学报2005年第27第二期13-17页阐述了高纯度胸腺五肽的分离和纯化方法，使用强阳离子交换层析介质SP Sepharose FF为层析介质纯化胸腺五肽，粗品载量为3.75mg/mL，最后制得色谱纯度大于98.23％的胸腺五肽回收率为67.03%。虽然该方法得到的产品纯度较高，但由于其载量过低，且SP Sepharose Fast Flow耐压性能较差，大大降低了其规模化制备的效率。

专利CN200510060559.4公开了一种胸腺五肽的纯化方法，先采用C18反相制备柱，流动相有甲醇与缓冲液组成，然后用Sephadex G25凝胶介质除盐，其中使用反相制备柱有效成分载量为0.13mg/mL时99%以上纯度回收率为90.4%；有效成分载量为0.27mg/mL时，99%以上纯度回收率为70.5%；有效成分载量为0.53mg/mL时，99%以上纯度回收率为20.3%。虽然该方法纯化的纯度较高，但是载量非常低，且使用的C18反相层析介质为硅胶基质，其不能耐碱，这不但降低了它的产率，而且还限制了它的应用范围。

专利CN200910087566.1公开了一种使用聚酰胺氢键吸附色谱分离纯化胸腺五肽的方法，该方法根据聚酰胺介质对胸腺五肽及其混合物中杂质吸附作用的差异达到纯化目的，最终95%以上的纯度回收率为90%。该方法回收率高，工艺简单，使用的吸附树脂成本低，对设备要求低，易于规模放大。但是该方法上样载量仅为0.2mg/mL粗品，且最终纯度较低，无法达到商品化要求的纯度。

发明内容

本发明的目的是提供一种能达到高载量、高纯度和高回收率，而且层析填料可耐高压和高流速的纯化方法。

为达到上述目的，本发明的技术方案是：单分散聚甲基丙烯酸酯强阳离子交换层析介质在胸腺五肽柱层析纯化中的应用，所述应用方法采用单分散聚甲基丙烯酸酯强阳离子交换层析介质为填料的色谱柱进行柱层析。

优选的，用所述单分散聚甲基丙烯酸酯强阳离子交换层析介质作为色谱柱的固定相，将含胸腺五肽的样品上样在该色谱柱上，用盐的水溶液作为流动相洗脱吸附在填料上的胸腺五肽。

优选的，所述盐的水溶液是NaCl的醋酸盐缓冲液。

优选的，所述单分散聚甲基丙烯酸酯强阳离子交换层析介质是由苏州纳微生物科技有限公司生产，产品型号为NM-MSP。

使用NM-MSP强阳离子交换层析介质纯化胸腺五肽时，只需要以不同浓度NaCl的醋酸盐缓冲液为洗脱液就可将吸附在填料上的杂质和胸腺五肽分别洗脱下来，达到高载量、高纯度及高回收率，同时，强耐反压性还使其能够在高流速下操作。

本发明的有益效果是：单分散聚甲基丙烯酸酯强阳离子交换层析介质NM-MSP不但利于以水溶液做流动相分离纯化胸腺五肽粗品，达到高纯度和高回收率，而且柱层析不会随着盐浓度和流速的变化而发生变化，层析填料可耐高压和高流速、并具备高载量。

附图说明

图l是实施例l中提纯前的胸腺五肽粗品的HPLC分析图谱。

图2是实施例l中提纯后的胸腺五肽的HPLC分析图谱。

图3是实施例3和实施例4的压力曲线。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明的技术方案作进一步的描述，但本发明并不限于这些实施例。

实施例1 ，