[发明专利]b型流感嗜血杆菌结合疫苗及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及流感嗜血杆菌疫苗，尤其涉及b型流感嗜血杆菌结合疫苗及其应用。

背景技术

流感嗜血杆菌根据荚膜的性质分为a，b，c，d，e，f型及不可分型，其中b型流感嗜血杆菌的侵袭力最强。由b型流感嗜血杆菌（Hib）引起的化脓性脑膜炎、肺炎、关节炎、会厌炎等疾病，已成为全球一个重要的公共卫生问题。而研制成功的Hib多糖疫苗及Hib结合疫苗，可有效预防由b型流感嗜血杆菌引起的感染。对于5对以下儿童，尤其是2周岁以下的婴幼儿，Hib多糖疫苗的保护效果不佳。

对于主要抗原是荚膜多糖的菌株而言，结合疫苗是目前改善多糖疫苗免疫原性的优良方法。蛋白载体具有T细胞依赖的特性，在荚膜多糖特异性抗原上加上蛋白载体可将非T细胞依赖性的多糖抗原转变为T细胞依赖性抗原，激发机体的T辅助细胞产生的一系列的免疫增强效应。对于免疫系统尚未发育成熟的婴幼儿，尤其是2周岁以下的婴幼儿而言，结合疫苗大大增强了其免疫效果。

现有技术广泛采用溴化氰活化，己二酰肼衍生，并在碳二亚胺存在下，与蛋白载体例如破伤风类毒素进行结合制备Hib结合疫苗，获得多糖蛋白结合物。

多糖蛋白结合物溶液是一个十分复杂的混合物体系，结合物中残留未结合的多糖和载体蛋白质等。在对多糖蛋白结合物进行纯化的过程中，多采用0.2mol/L的氯化钠溶液作为流动相。但是，采用0.2mol/L的氯化钠溶液作为流动相，多糖蛋白结合物回收率低。而且多糖蛋白结合物的纯化采用0.2mol/L的氯化钠溶液，不利于后续工序包括分装后产品的稳定性。

发明内容

本发明的目的是提供b型流感嗜血杆菌结合疫苗，用于提高多糖蛋白结合物的稳定性。

本发明另一目的是提供b型流感嗜血杆菌结合疫苗的剂型。

本发明再一目的是提供疫苗在制备预防由b型流感嗜血杆菌感染导致的脑膜炎、肺炎、败血症、蜂窝组织炎、关节炎、会厌炎感染性疾病的药物中的应用。

本发明所述b型流感嗜血杆菌结合疫苗，包括如下组分和含量：

b型流感嗜血杆菌多糖    20-30μg/ml；

破伤风类毒素           40-100μg/ml；

pH 7.2-7.5。

所述的b型流感嗜血杆菌结合疫苗，其制备方法包括以下步骤：

1）制备b型流感嗜血杆菌多糖；

2）制备b型流感嗜血杆菌多糖-破伤风类毒素结合物混合液；

3）纯化：以TRIS-HCl缓冲液作为流动相，用层析法纯化步骤2）中的混合液，得到b型流感嗜血杆菌结合疫苗原液。

其中，所述TRIS-HCl缓冲液，浓度为20-100mmol/L，pH值为7.2-7.5，优选所述TRIS-HCl缓冲液浓度为20-50mmol/L。

具体地，步骤如下：

1）发酵培养b型流感嗜血杆菌：采用b型流感嗜血杆菌生产用菌株，菌株复壮、培养、发酵，发酵液通过甲醛杀菌后收获培养物；

2）制备b型流感嗜血杆菌多糖：收集的培养物经过离心去除菌体，加入沉淀剂沉淀上清液中的多糖，经过研磨、乙醇沉淀去除核酸，并经过冷酚溶液抽提去除杂蛋白，并通过超滤方法去除残留小分子物质，通过乙醇沉淀制备精制多糖；

3）制备b型流感嗜血杆菌多糖-破伤风类毒素结合物：精制多糖经过溴化氰活化、己二酰肼衍生、在碳二亚胺作用下与破伤风类毒素结合；

4）以TRIS-HCl缓冲液作为流动相，用层析法纯化制备b型流感嗜血杆菌结合疫苗原液。

本发明所述疫苗还包括赋形剂，所述赋形剂为TRIS-HCl缓冲液和氯化钠或TRIS-HCl缓冲液和乳糖。

其中，所述TRIS-HCl缓冲液浓度为8-12mmol/L、氯化钠7.5-9.5mg/ml、乳糖20-30mg/ml。

本发明还提供含有上述b型流感嗜血杆菌结合疫苗的制剂，包括液体剂和冻干制剂。

本发明所述b型流感嗜血杆菌结合疫苗的液体剂的组分为b型流感嗜血杆菌多糖-破伤风类毒素结合物、TRIS-HCl缓冲液和氯化钠组成，其中，各组分的浓度为：

b型流感嗜血杆菌多糖    20-30μg/ml；

破伤风类毒素           40-100μg/ml；

TRIS-HCl缓冲液         8-12mmol/L；

氯化钠                 7.5-9.5mg/ml。

上述b型流感嗜血杆菌结合疫苗液体剂的制备方法，包括如下步骤：