[发明专利]一种扁座壳孢菌发酵生产壳聚糖酶的培养基及方法

说明书

技术领域

本发明涉及真菌的发酵培养基及其工艺。确切的讲，本发明涉及一种扁座壳孢菌发酵生产壳聚糖酶的培养基及方法。

背景技术

壳聚糖酶(Chitosanse EC3.2.1.132)又称壳聚糖-N乙酰-氨基葡糖苷水解酶，是一种分解壳聚糖的专一性酶，广泛分布在细菌、真菌、病毒以及植物等生物群中，其大部分为碱性蛋白，等电点PI为7.0-8.5，最适pH为4.5-8.0。在pH为6.0-8.0，37℃时壳聚糖酶非常稳定，超过40℃后酶很快失活。壳聚糖酶能够水解含有壳聚糖的细胞壁，在室温下可稳定存在几个小时，冷冻和干燥情况下则可数月保存，酶粉可溶于水和一系列缓冲溶剂，活性pH和温度范围很广。70年代初期，Monaghant在研究细菌和真菌过程中，首先提出壳聚糖酶是一种不同于几丁质酶的新酶，这种酶对胶态几丁质不水解，但是能够降解完全脱乙酰化的壳聚糖，被认为是对线性壳聚糖具有水 解专一性的一种酶，1992年壳聚糖酶被系统命名。 2004年，国际酶委员会对壳聚糖酶的定义作了修改， 重新定义为：以内切方式催化水解部分乙酰化壳聚糖中的β-l，4氨基葡萄糖苷键的酶。壳聚糖酶主要存在于真菌和细菌细胞中，在单子叶和双子叶植物的不同组织中也发现有该酶活性。

在壳聚糖等在壳聚糖酶的作用下产生的壳寡糖具有重要的价值，能提高机体的免疫能力和抗癌能力，改善肠道微生物的区系分布等医学作用。农业上其可以刺激有益苗的生长，还可作为植物功能调节剂，刺激植物生长口，增强农作物对病虫害的防御能力。在食品上对乳酸的后酸化起到了极为明显的抑制作用等。

发明内容

本发明的目的在于提供一种扁座壳孢菌发酵生产壳聚糖酶的培养基及方法。

首先本发明提供了一种扁座壳孢菌发酵生产壳聚糖酶的培养基，所述培养基的原料由A液和B液组成，A液为胶体壳聚糖，质量浓度为0.3～1%，pH=5～6.2，B液按重量分数由以下组成：NaH₂PO₄ 0.3-0.5%，(NH₄)₂SO₄ 2-4%，Na₂HPO₄ 0.1-0.3%，NaNO₃ 0.1-0.3%，MgSO₄^。7H₂O 0.05-0.2%，CaCL₂ 0.002-0.003%，KCl 0.3-0.5%，L-阿拉伯糖3-4%，叶酸0.04-0.05%，余量为水；将A液与B液分开高压灭菌，待各自冷却到60℃时等体积混合。

优选地，所述胶体壳聚糖，质量浓度为0.375%，pH=5。

优选地，所述B液按重量分数由以下组成：NaH₂PO₄ 0.41%，(NH₄)₂SO₄ 3%，Na₂HPO₄ 0.2%，NaNO₃ 0.2%，MgSO₄^。7H₂O 0.1%，CaCL₂ 0.002%，KCl 0.4%，L-阿拉伯糖3%，叶酸0.04%，余量为水。

本发明还提供了一种扁座壳孢菌发酵产壳聚糖酶的方法，所述方法包含以下步骤：

（1）    菌种种子培养：菌种活化后接种于种子培养基，在26±1℃，160rpm的条件下培养2～3d，制得发酵种子液；

（2）    将步骤（1）中制得的发酵种子液按接种于权利要求1、2或3所述的培养基，250mL的三角瓶装液量为75mL，接种量2mL/50 mL，在转速160rpm，26±1℃下培养。

所述种子培养基的原料含有：20%土豆汁1L，葡萄糖20g，琼脂20g，pH5.0。

所述的扁座壳孢菌（何学友等，油茶黑胶粉虱及扁座壳孢对其自然控制作用，中国森林病虫，2011年7月）。