[发明专利]一种红腺忍冬叶绿原酸的超声提取方法

权利要求书

1.一种红腺忍冬叶绿原酸的超声提取方法，其特征在于，该超声提取方法包括以下步骤：

步骤1，进行绿原酸含量测定，主要包括：

(1)最大吸收波长的确定

分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液适量，置10mL量瓶中，再加水至刻度，摇匀，放置15min，以相应试剂为空白，在分光光度计上于200-400nm扫描；对照品溶液与供试品溶液在328nm处均有最大吸收，故将328nm作为测定波长；

(2)对照品溶液的制备

精密称取对照品10mg，加适量70％乙醇，置水浴上微热使溶解，放冷后定容至50ml，摇匀，即得，每1ml含红腺忍冬叶0.2mg；

(3)标准曲线的绘制

精密量取对照品溶液2、4、6、8、10、12mL，分别置于50mL量瓶中，加水适量，摇匀.再加水至刻度，摇匀，放置15min，以相应试剂为空白.在328nm波长处测定吸光度。以绿原酸标品的浓度为横坐标，以在328nm下测得不同浓度的绿原酸标准品的吸光值为纵坐标，做标准曲线，得回归方程；

步骤2，进行红腺忍冬叶中绿原酸超声提取的单因素试验，主要包括：

药材红腺忍冬叶片经60℃烘干，再粉碎过60目筛，称取一定量粉碎的红腺忍冬叶与一定量的溶剂于烧杯中，放入超声波清洗器一定时间，过滤，再将溶液放入烧瓶，用旋转蒸发仪进行浓缩提取，干燥得到提取粗品，在紫外分光光度计下测定吸光值，并计算绿原酸的提取率；

分别对影响超声提取的每一因素，设计5个水平进行试验，通过比较提取率确定对提取率影响较大的4个因数进行正交试验；

(1)溶剂乙醇浓度

按乙醇浓度40％，50％，60％，70％，80％，其它提取条件为提取1次、提取时间10分钟、溶剂体积为药材重量8倍和提取温度60℃的情况下进行超声提取。比较提取率，得出最佳溶剂乙醇浓度；

(2)溶剂体积(药材重量倍数)

按溶剂体积为6倍、8倍、10倍、12倍、14倍，其它提取条件为提取1次、提取时间10分钟、最佳乙醇浓度和提取温度60℃情况下，进行超声提取，比较提取率，得出最佳溶剂体积；

(3)提取温度

按提取温度40℃、50℃、60℃、70℃、80℃，其它提取条件：提取1次、提取时间10分钟、最佳乙醇浓度、最佳溶剂体积情况下，进行超声提取，比较提取率，得出最佳提取温度；

(4)提取时间(分钟)

按提取时间15min、20min、25min、30min、35min，其它提取条件为提取1次、最佳乙醇浓度、最佳溶剂体积和最佳提取温度的情况下，进行超声提取，比较提取率，得出最佳提取时间；

(5)提取次数

按提取次数1次、2次、3次、4次、5次，其它提取条件为最佳提取时间、最佳乙醇浓度、最佳溶剂体积和最佳提取温度的情况下，进行加热回流提取，比较提取率，得出最提取次数。

2.如权利要求1所述的红腺忍冬叶绿原酸的超声提取方法，其特征在于，该提取方法进一步包括红腺忍冬叶中提取物的TCL检测方法：

步骤1，硅胶G薄层的制备

将3.5g羧甲基纤维素钠用100ml加热溶解，在研钵中将硅胶碾匀，均匀铺在玻片上，自然风干，待用；在108℃烘箱内活化半个小时待用；

步骤2，TCL检测

用毛细管吸取红腺忍冬叶提取物的乙醇溶解液和对照品乙醇溶解液，在距硅胶薄层板下边缘8mm的位置进行点样，点样斑点的直径为1-2mm。以正丁醇-冰醋酸-水(7∶1∶2)为展开剂展开。待展开8cm时，自然晾干，放于紫外灯下观察，记录显色荧光点的颜色，并计算比移值(Rf)。

3.如权利要求1所述的红腺忍冬叶绿原酸的超声提取方法，其特征在于，该提取方法得到的红腺忍冬叶中绿原酸提取的最佳工艺条件为：乙醇的体积为红腺忍冬叶质量的8倍，提取次数3次，乙醇浓度为60％，提取温度为50℃。