[发明专利]北豆根抗肿瘤提取物、制备方法及用途

说明书

技术领域：

本发明涉及一种北豆根抗肿瘤提取物、制备方法及用途。

背景技术：

北豆根系防已科植物蝙蝠葛的干燥根茎，现在的北豆根有效成分提取工艺均采用生物碱的常规提取方法：即酸提碱沉结合碱化后有机溶剂萃取，此提取方法存在有机试剂残留，而且操作繁琐。

发明内容：

本发明的目的是采用一种北豆根抗肿瘤提取物的制备方法，此方法只用到了水和乙醇，使提取物无有机残留，可以与药物赋形剂制成适合于临床使用的中药有效部位的抗肿瘤药物。

上述的目的通过以下的技术方案实现：

一种北豆根抗肿瘤提取物的制备方法，该方法包括如下步骤：

（1）浸泡提取：取北豆根药材用8～10倍重量的75%～95%乙醇溶液浸泡24小时后，用超声波提取器提取三次，将所述的三次提取液充分混合；

（2）浓缩、分散、离心：将混合后的提取液减压浓缩至无醇味后，再把浓缩液和水按体积比1:1稀释，进行离心分离处理；

（3）用大孔吸附树脂：取离心处理后的上清液注入已处理好的AB-8大孔吸附树脂，上清液与树脂的重量比例为1：2；

（4）洗脱：将吸附树脂进行洗脱，流速为1倍柱床体积/小时，依次用3～5倍柱床体积的蒸馏水洗脱、5倍柱床体积的10%乙醇溶液洗脱和4倍柱床体积的70%乙醇溶液洗脱；

（5）制得抗肿瘤提取物：收集70%的乙醇洗脱液，进行浓缩收干，得到干燥的固体即为北豆根抗肿瘤提取物。

一种北豆根抗肿瘤提取物在抗肿瘤领域药品制备中的应用。

一种北豆根抗肿瘤提取物，通过以下方法制得：

1）浸泡提取：取北豆根药材用8～10倍重量的75%～95%乙醇溶液浸泡24小时后，用超声波提取器提取三次，将所述的三次提取液充分混合；

（2）浓缩、分散、离心：将混合后的提取液减压浓缩至无醇味后，再把浓缩液和水按体积比1:1稀释，进行离心分离处理；

（3）用大孔吸附树脂：取离心处理后的上清液注入已处理好的AB-8大孔吸附树脂，上清液的与树脂的重量比例为1：2；

（4）洗脱：将吸附树脂进行洗脱，流速为1倍柱床体积/小时，依次用3～5倍柱床体积的蒸馏水洗脱、5倍柱床体积的10%乙醇溶液洗脱和4倍柱床体积的70%乙醇溶液洗脱；

（5）制得抗肿瘤提取物：收集70%的乙醇洗脱液，进行浓缩收干，得到干燥的固体即为北豆根抗肿瘤提取物。

一种北豆根抗肿瘤提取物在抗肿瘤领域药品制备中的应用，抑制人乳腺癌细胞MCF-7的活性实验是：细胞培养、细胞毒测定、药效学试验及试验方法：

细胞培养：

人乳腺癌细胞MCF-7培养于 RPMI 1640 培养基，补加10%胎牛血清、L-谷氨酰胺、100 U/ml青霉素以及 100 mg/ml 链霉素，将细胞置于37 ºC，5% CO₂饱和湿度的培养箱中进行培养，孵育2-3天后再用0.25%胰蛋白酶进行消化传代，选取对数生长期细胞进行后续的实验。

细胞毒测定：

10批北豆根药材按照上述的制备过程制备的抗肿瘤提取物，用培养液稀释至不同浓度后，用0.22 mm的微孔滤膜过滤，将所得的续滤液用于肿瘤细胞增殖抑制实验，在无菌的96孔板中，接种的细胞密度为每孔1 × 10⁵个/ml，用量为每孔100 ml，然后分别加入5 mg/ml、1 mg/ml、0.2 mg/ml、0.04 mg/ml四个梯度浓度的样品溶液，每孔加入100 ml，每个样品设3个复孔，另外设4个空白对照孔，空白对照孔中只加100 ml的完全培养基，不加细胞；设4个阴性对照孔，只加100 ml细胞悬液。将其进行48 h培养，采用MTT法进行测定，即培养后的细胞，加入10 ml MTT5 mg/ml磷酸盐缓冲液，37°C、5% CO₂培养箱中培养4小时，离心，取上清液150 ml 弃去，加入175ml DMSO，振摇10分钟后，用酶标仪在550 nm测定吸光值。根据公式计算得IC₅₀。对照孔：仅加细胞不加药物，空白孔：仅加溶剂不加细胞和药物，实验孔：加细胞再加药物。

药效学试验：

试验动物：昆明种小鼠，体重18g-22g,雌雄兼用。

药物与试剂：注射用生理盐水，5-氟尿嘧啶，北豆根提取物，瘤株:小鼠肝癌H₂₂。

试验方法：