[发明专利]萝卜霜霉病抗性基因紧密连锁的分子标记

说明书

技术领域

本发明属于作物遗传育种领域，涉及萝卜霜霉病抗性基因紧密连锁的分子标记。

背景技术

萝卜(Raphanus sativus L.)又名莱菔，是一种重要十字花科根菜类蔬菜作物，我国萝卜种质资源丰富，栽培历史悠久；萝卜主要以膨大的肉质直根供食用，具有较高的营养价值和食疗功效，深受人们喜爱（汪隆植与何启伟主编，中国萝卜，北京：科学技术文献出版社，2005）。

霜霉病（downy mildew）是萝卜生产上一种危害性很大的病害，该病病原菌是鞭毛菌亚门卵菌纲霜霉属的一种专性活体寄生菌，该病在世界各地均有分布。近几年，萝卜霜霉病的病害发生严重，尤其是在温度适宜、潮湿的环境下更易发生，南方适温高湿的环境为霜霉菌的生活提供了适宜条件，春季保护地栽培更是萝卜霜霉病的高发季节。萝卜霜霉病发病部位多为植株叶片、茎部、根部、种株花器官及种荚，在萝卜整个生长时期（子叶期至采种期）都容易发生，对萝卜的品质、产量以及良种繁育等造成了严重影响。

分子标记技术已经被广泛应用于蔬菜作物遗传育种研究中。成功进行重要性状基因紧密连锁的分子标记鉴定，在品种选育过程中可以跟踪、检测特定性状基因，有效减少或免除传统育种中繁杂的性状鉴定工作，还可以通过标记辅助选择，把多个抗病等重要性状功能基因聚合到同一优良品系中。相关序列扩增多态性（sequence related amplified polymorphism,SRAP）是一种新型的基于PCR的遗传标记系统，具有简单、高效、重复性高等优点（Li G&Quiros CF.Sequence-related amplified polymorphism(SRAP),a new marker system based on a simple PCR reaction:its application to mapping and gene tagging in Brassica.Theoretical and Applied Genetics,2001,103:455-461）。目前，SRAP已成功应用于作物的品种鉴定、遗传连锁图谱构建以及性状遗传标记分析工作中。

混合分离分析（Bulked SegregantAnalysis，BSA）策略是快速获得与目标性状基因紧密连锁分子标记的有效方法，尤其是对于尚无遗传连锁图或连锁图饱和程度较低的植物（Michelmore RW，Paran I,Kesseli RV.Identification of markers linked to disease resistance genes by bulked segregant analysis:A rapid method to detect markers in specific genomic regions by using segregating populations.Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1991,88:9828-9832）。在分离群体中选择目标性状极端差异的植株构建两个DNA池（bulk），在两个基因池间表现出多态性的DNA标记，有可能与目标基因连锁。目前，利用BSA策略已经标记和定位了许多重要的质量性状基因，如莴苣抗霜霉病基因、水稻抗瘿蠓基因以及抗稻瘟病基因等(方宣钧，吴为人，唐纪良.作物DNA标记辅助育种.北京：科学出版社，2001)。

抗病育种是现代作物遗传育种领域重要的研究方向，选育抗病品种是当前控制作物病害最经济、最有效的途径。抗病品种培育过程中，抗性鉴定是关键环节之一。萝卜霜霉病菌为专性寄生真菌，萝卜霜霉病抗性鉴定评价涉及到病菌收集、活体保存、接种、植株管理、病情调查等多个步骤，传统接种鉴定不仅费时，而且受接种孢子液浓度、接种环境条件等因素影响，严重影响了植株抗性鉴定结果准确性与抗性选择效率。通过筛选与萝卜霜霉病抗性基因紧密连锁的分子标记，在苗期就可利用标记进行霜霉病抗性鉴定，一般1~2天即可获得结果，而且不受环境条件的影响，结果快速、准确。这种基于分子标记的基因型选择（标记辅助选择）克服了许多基于表型选择方法的缺点，可以明显提高目标性状选择效率，显著缩短育种年限，加快抗病新品种培育进程。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的上述不足，提供一种萝卜霜霉病抗性基因紧密连锁的分子标记。

本发明的另一目的是提供该分子标记的引物。

本发明的又一目的是提供该分子标记的应用。

本发明的目的可通过如下技术方案实现：