[发明专利]超灵敏黄曲霉毒素B1酶联免疫检测试剂盒

权利要求书

1.一种检测黄曲霉毒素B₁的酶联免疫检测超灵敏试剂盒，所述试剂盒包括黄曲霉毒素B₁标准溶液，固相载体，酶标记物，底物显色液，样品稀释液，终止液及浓缩洗涤液，其特征在于，所述固相载体为微孔板，且所述微孔板由黄曲霉毒素B1单克隆抗体包被，所述酶标记物为辣根过氧化物酶标记的黄曲霉毒素B1完全抗原，所述底物显色液含四甲基联苯胺(TMB)，终止液含硫酸。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述抗体是黄曲霉毒素B1的特异性高亲和力单克隆抗体，间接ELISA效价达1∶32万；所述酶标抗原是黄曲霉毒素B1完全抗原与辣根过氧化物酶偶联物；酶与完全抗原的偶联比是3∶1～8∶1。

3.根据权利要求2所述试剂盒，其特征在于，所述酶标抗原含有：

黄曲霉毒素B1完全抗原

辣根过氧化物酶

所述黄曲霉毒素B1完全抗原的黄曲霉毒素B1与蛋白偶联比是：8∶1～14∶1

所述酶与抗体的偶联比是：3∶1～8∶1

4.根据权利要求1～3任一项所述试剂盒，其特征在于，所述浓缩洗涤液含有：

5.根据权利要求4所述试剂盒，其特征在于，所述浓缩洗涤液含有：

6.一种检测黄曲霉毒素B1的酶联免疫检测超灵敏试剂盒的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

A、制备固相载体：将0.05mol/L碳酸盐缓冲液(pH值为9.0-9.6)与曲霉毒素B1的特异性高亲和力单克隆抗体或完全抗原以适当比例混合，将混合液负载于载体上，用含0.05％吐温20(体积)的磷酸盐缓冲液洗涤后，用保护液封闭保护上述洗涤后的载体；

B、制备辣根过氧化物酶标记的黄曲霉毒素B1的完全抗原或单克隆抗体：采用改进过的高碘酸钠法制备辣根过氧化物酶标记的黄曲霉毒素B1的完全抗原或单克隆抗体，采用棋盘滴定法选择最佳的酶标记物的工作浓度。酶标抗原或抗体溶于酶稀释液中以制备抗原或抗体工作溶液；

C、制备底物显色液

a)显色A溶液的制备：以DMSO为稀释液配制成较低浓度的四甲基联苯胺(TMB)溶液即成。

b)显色B溶液的制备：以去离子水为稀释液配制成一定浓度的一水合柠檬酸、过氧化氢尿素和十二水磷酸一氢钠混合液即成。

D、制备浓缩洗涤液：

浓缩洗涤液中含有：

E、制备黄曲霉毒素B1标准溶液：用黄曲霉毒素B1的纯品配制，分装0、0.1、0.3、0.9、2.7、8.1ng/mL共6瓶，过滤除菌、分装、低温避光保存。

F、制备终止液：

终止液含有：

硫酸                15％(质量)

G、制备样品提取液

所述样品提取液含有：

甲醇                50～80％(体积)

NaCL                2～10％(重量)

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述浓缩洗涤液含有：

所述样品提取液含有：

甲醇     70％    (体积)

NaCL     4％     (重量)