[发明专利]一种HIV-1耐药野生型基因合成方法

权利要求书

1.一种HIV-1耐药野生型基因合成方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1） 把HIV-1耐药野生型基因,分成若干N段（n=20-40）的A碱基片段,即 A1，A2，A3，A4，A5…An,并进行人工合成，

设计并人工合成与上述片段互补的N-1碱基片段，即B1，B2，B3，B4…Bn-1 ；其中，任一Bn碱基片段的5’端比各耐药野生型基因片段的An碱基片段5’端后移20-25bp；Bn碱基片段的端延伸到耐药野生型基因片段的An+1碱基片段5’端20-25bp，

根据上述相互匹配的两两对应互补片段设计并合成正向、反向引物；

（2）将上述相互对应部分互补的碱基片段分别进行PCR扩增，即A1/B1, A2/B2, A3/B3…… An/Bn,由部分互补变为完全互补片段； 

（3）再将上述具有互补片段的相邻扩增产物，二次扩增；

（4）以3个A碱基片段为单位分别合成167bp片段，并需要进行琼脂糖凝胶的割胶回收纯化，标记为C1，C2，C4，C5…Cn/3, 最后一个An片段可与Cn/3连接；

（5）再运用PCR分别两两扩增C1和C2；C3和C4，C5和C6，C7和C8，C9和C10各可得到309bp片段，标记为D1，D2，D3，D4，D5；

（6）再运用PCR分别两两扩增D1和D2，D3和D4可得598bp片段，标记为E1，E2，D5跟E2连接可得F1=887bp；

（7）最后将E1和F1进行PCR连接就可以得到1508bp的片段；

（8）将片段插入TA载体中，并鉴定野生型模板是否构建正确。

2.根据权利要求1所述的HIV-1耐药野生型基因合成方法，其特征在于，

所述步骤（1）中，把HIV-1耐药野生型基因分成31段并进行人工合成，每段含有44-49个碱基,如Seq No.1～31所示；

设计并人工合成与HIV-1耐药野生型基因互补的碱基片段30段，每段含40个碱基,如Seq No. 32～61所示；

   根据上述相互匹配的两两对应互补片段设计并合成正向、反向引物,如Seq No. 62～101所示。