[发明专利]一种香椿叶中没食子酸及其甲酯的同时制备及检测方法

说明书

 

技术领域

    本发明涉及利用高效液相色谱技术对香椿叶中两种抗氧化活性物质没食子酸和没食子酸甲酯进行同时制备以及定量检测，属于中药技术领域。

背景技术

    楝科乔木香椿（Toona sinensis A. Juss. Roemer）广泛分布于整个亚洲，尤其在中国和印度地区普遍栽培，春季采收的新鲜嫩叶（Chinese Toon）是当地民众最喜欢的时令蔬菜之一。此外，香椿叶（Toonea Sinensis Folium）为该植物的干燥树叶，是一味具有解毒和消炎功效的中药，临床中主要被用于治疗口臭、呕吐、痢疾、食欲不振、肠炎和瘙痒等病症，到目前为止在使用中尚未观察到任何副作用。

    一方面，因为抗氧化剂可有效地减轻氧化应激；另一方面，尽管合成抗氧化剂在很长时间内已广泛用于食品、药品或化妆品，但是其安全性存疑，引起人们的普遍焦虑；因此，近年来植物源性抗氧化剂逐渐成为科学家研究的重点。

目前，对香椿叶中活性物质基础的提取分离主要为某类化合物的总体。例如，中国专利200510069895.5中，以60%乙醇于60^oC下提取2次，每次提取60分钟，经过过滤、浓缩和干燥，最终可分别同时得到90%提取率的总黄酮与总皂甙；中国专利200810073836.9、201010263595.1中，分别采用双水相体系、表面活性剂辅助等方法富集香椿叶中的总黄酮；中国专利200710058385.7中，利用60%乙醇提取、AB-8大孔吸附树脂获取具有抗氧化活性的提取物。

另外，2007年Kai-Jin Wang等（Food Chemistry，Vol. 101，P365～371）以80%丙酮冷浸提取，粗提物依次用乙醚、乙酸乙酯分别萃取，然后结合使用Diaion HP20SS、Sephadex LH-20、MCI-gel CHP20P和Chromatorex ODS四种填料经过反复柱层析从乙酸乙酯萃取部位中分离得到了没食子酸、没食子酸甲酯，并且用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基清除实验证明了两者均具有突出的抗氧化活性；2009年Ka-Wing Cheng等（Journal of Functional Foods，Vol. 1，P253～259）以70%甲醇超声提取，将氯仿萃取后的萃余物用反相键合C₁₈、Sephadex LH-20、Polyamide-6、正相硅胶为填料或采用半制备高效液相色谱进行分离，获得了没食子酸、没食子酸甲酯；但是，该些方法均使用了价格高昂的Sephadex LH-20为填料，且分离中涉及使用多种分离材料进行反复柱层析，至少经过三次柱色谱分离，步骤繁琐，时间和试剂消耗大；而使用半制备高效液相色谱法时，处理量较小，并且这两种活性化合物在进行初步分离时分散于不同的流分，导致后续实验中不能对两者进行同时制备。

在检测方面，2002年张仲平等（中国野生植物资源，Vol. 2（14），P52～53）、2011年Ying Yang等（Food Chemistry，Vol. 128，P831～838）仅对香椿叶中的没食子酸进行了定性检识。2006年Ming-Mu Hsieh等（Journal of the Chinese Chemical Society，Vol. 53，P1203～1208）利用胶束电动毛细管电泳对没食子酸、没食子酸甲酯等多酚类成分进行定量分析，但是两者与其它成分未实现基线分离（R<1.5），且并未对准确性、重现性、稳定性等重要技术指标进行考察，可靠性差；除此之外，由于可调节参数较少、应用范围较窄等原因，在医药化工行业的生产实践中，毛细管电泳的普及程度远不如高效液相色谱，造成实际应用困难。

现代高效液相色谱技术按照应用目的，可分为制备型和分析型两种，均具有速度快、产物纯度与回收率高、分离填料可反复利用等特点，是目前对中药及食品中活性化合物进行分离与分析的最为常用的技术手段。到目前为止，基于该技术对这两种抗氧化活性物质在香椿叶药材中的同时制备方法及相应的定量分析方法尚未加以研究。

 

发明内容

    本发明的目的在于克服现有技术不能对没食子酸及其甲酯进行同时制备、操作繁琐、代价高昂、分析的可靠性差、应用困难等不足，提供一种基于高效液相色谱技术从香椿叶中同时制备两种植物源性抗氧化剂没食子酸和没食子酸甲酯，并测定香椿叶药材中这两种成分含量的方法。

本发明通过以下步骤达到同时制备没食子酸和没食子酸甲酯的目的：