[发明专利]口蹄疫灭活疫苗安全种毒载体及应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种口蹄疫灭活疫苗安全种毒载体及应用，即在该载体基础上构建不同血清型的口蹄疫灭活疫苗安全生产种毒。属于兽用生物制品领域。 

背景技术

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起偶蹄动物的一种急性、热性、高度传染性病毒性疾病。该病除一些岛国外，曾广泛流行世界各地，给世界畜牧业造成了巨大的经济损失，为控制和扑灭口蹄疫世界各国投入巨资，截止2007年5月，OIE公布59个国家为非免疫的无口蹄疫国家，9个国家部分地区为非免疫的无口蹄疫地区，7个国家或地区为免疫无口蹄疫国家。口蹄疫目前仍然在亚洲、非洲、南美部分国家和地区流行。无口蹄疫国家为了防止口蹄疫的传入和再次爆发，特别是发达国家制定了一系列近乎残酷的国际贸易条例，限制口蹄疫流行国家动物及其产品世界贸易。OIE也将该病列为头号动物疫病，所以口蹄疫素有“政治经济病”之称（谢庆阁主编，口蹄疫，中国农业出版社，2004）。 

口蹄疫预防控制策略主要包括两大类：其一是以扑杀为主的综合防控措施，是无口蹄疫的发达国家主要采取的措施，其二是以免疫为主的综合防控措施，是口蹄疫流行国家和经济不发达无口蹄疫国家所采取的主要措施，也是欧洲大多数国家60年代和南美部分国家80年代成功的控制和扑灭口蹄疫的主要措施，疫苗在其中发挥了至关重要的作用。针对我国及其周边国家和地区口蹄疫流行状况，我国采取以免疫为主，实施全国大面积普遍免疫结合局部扑杀和其它综合防控措施控制口蹄疫。实施免疫为主的综合防控措施的关键环节之一是疫苗。 

易感动物在感染口蹄疫病毒或免疫口蹄疫病毒抗原以后，可以诱导机体产生抗口蹄疫病毒抗体，该抗体可以抵抗同型病毒的再次感染，所以人们自1925年开始就研究出口蹄疫病毒灭活疫苗用于口蹄疫的预防控制。为了提高疫苗的免疫效力和安全性对口蹄疫疫苗进行了不断的探索和改进。对传统灭活疫苗改进了灭活剂，由传统的甲醛灭活改为更安全的BEI，为了提高免疫效力将氢氧化铝水剂佐剂改为更为有效的免疫持续期更长的矿物油佐剂。探索了弱毒疫苗的可行性，先后研制了非易感动物传代、化学试剂或温度诱变等方法致弱疫苗毒株，60年代在临床上试用，发现很难找到毒力与免疫原性的平衡点，加上口蹄疫病毒宿主范围广，致弱毒株在不同宿主之间毒力差异比较大，逐渐停用或禁用。90年代人们采用基因工程方法， 改变结构蛋白及病毒受体结合位点“RGD”或删除致病基因“L蛋白”编码基因，构建新型基因工程致弱毒株，实验研究表明这些毒株可以作为弱毒疫苗毒株免疫动物，而且安全性能比传统致弱毒株高，但考虑到使用弱毒疫苗毒株不利于感染与免疫鉴别诊断而未广泛使用。口蹄疫基因工程疫苗，包括原核、真核表达系统，植物表达系统表达抗原，DNA疫苗，各种载体系统（腺病毒、痘苗病毒、伪狂犬病毒等）构建的载体疫苗，合成肽疫苗等一度给口蹄疫安全高效疫苗的研究带来了希望，但至今除猪用合成肽疫苗据报道有效果以外，没有一种通过国家或地区审评批准上市的口蹄疫新型疫苗。口蹄疫预防控制仍然采用传统灭活疫苗，是经过历史考验的最为有效的口蹄疫疫苗，但作为传统疫苗不可否认具有自身的缺陷。 

口蹄疫灭活疫苗的生产和检验必须使用强毒株病毒，疫苗生产首先采用强毒株在BHK21细胞中大量繁殖，经过灭活、纯化，配以适当的佐剂乳化而成。成品疫苗还必须使用免疫本动物强毒株攻毒进行检验。世界上严格规定口蹄疫疫苗制造、口蹄疫病毒研究必须在生物安全3级以上实验室进行，实验室或疫苗生产车间必须有高度安全的防泄漏系统，必须有高效空气过滤系统，疫苗制备抗原必须彻底灭活口蹄疫病毒，防止病毒泄漏扩散造成疫病暴发，所以灭活疫苗的安全性一直是人们关注的焦点。甲醛是口蹄疫灭活疫苗最初采用的灭活剂，但由于甲醛灭活凝固蛋白，易造成病毒大量聚集灭活不彻底，后来更换为BEI，据文献报道欧洲80年代前后发生几次口蹄疫与疫苗灭活不彻底有关，欧盟于1990年停止使用疫苗。欧美等发达国家建有口蹄疫疫苗抗原库，用以配制紧急疫苗，但他们明确规定不能在本国生产灭活抗原，其保存抗原都是在非洲、南美等生产厂家生产灭活以后购进储藏的。位于英国的世界口蹄疫参考实验室周边曾在70年代发生过一次南非2型口蹄疫，据报道因实验室泄漏造成。据2005年世界口蹄疫参考实验室年度报告指出，近年来全世界C型口蹄疫发生很少，2004年肯尼亚发生一次C型口蹄疫可能与当地使用疫苗有关，鉴于此建议世界范围停止使用C型疫苗。2007年英国发生一次O型口蹄疫，分离毒株鉴定与1976年分离的实验室毒株O1BFS相近，本次暴发口蹄疫可能与发生地附近疫苗厂下水道泄漏有关。