[发明专利]产(R, R)-2,3-丁二醇的基因工程菌及其构建方法和应用

权利要求书

1.产(R, R)-2,3-丁二醇的基因工程菌，是将budB基因、budA基因和ydjL基因通过表达载体导入宿主菌得到的重组菌。

2.根据权利要求1所述产(R, R)-2,3-丁二醇的基因工程菌，其特征在于：所述宿主菌为大肠杆菌(Escherichia coli) MG1655。

3.根据权利要求2所述产(R, R)-2,3-丁二醇的基因工程菌，其特征在于：所述表达载体为pTrc99a。

4.一种构建权利要求1-3所述产(R, R)-2,3-丁二醇的基因工程菌的方法，包括如下步骤：

（1）从肺炎克雷伯氏杆菌(Klebsiella pneumoniae) CICC 10011中分别扩增budB基因和budA基因，从枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) 168中扩增ydjL基因；

（2）利用重叠延伸PCR技术将budB基因、budA基因和ydjL基因拼接得到budB基因、budA基因和ydjL基因的融合基因；

（3）将所述融合基因插入表达载体的多克隆位点处，得到重组质粒；

（4）将所述重组质粒导入宿主内即得所述产(R, R)-2,3-丁二醇的基因工程菌。

5.根据权利要求4所述构建产(R, R)-2,3-丁二醇的基因工程菌的方法，其特征在于：步骤（1）中用于扩增budB基因的引物为P1和P2；用于扩增budA基因的引物为P5和 P6；用于扩增ydjL基因的引物为P9和P10；

所述P1、P2、 P5、P6、P9和P10序列分别为：

P1：5’-GATATGGACAAACAGTATCCGGT-3’，

P2：5’-GCGTTACAGAATCTGACTCAGAT-3’，

P5：5’-GCTATGAATCACTCTGCTGAATG-3’，

P6：5’-GTCTTAACTTTCTACGGAACGGA-3’，

P9：5’-TCACCATGGGCATGAAGGCAGCAAGA-3’，

P10：5’-GGCGTCGACTTAGTTAGGTCTAACA-3’。