[发明专利]抗白唇竹叶青蛇毒卵黄抗体的制备方法

权利要求书

1.一种抗白唇竹叶青蛇毒卵黄抗体的制备方法，其包括如下步骤：

(1)取成年白唇竹叶青蛇的蛇毒制备白唇竹叶青蛇毒抗原，将抗原注射到产蛋母鸡中，免疫后收集鸡蛋低温保存；

(2)提取和纯化抗白唇竹叶青蛇毒卵黄抗体：

①水稀释法

取免疫后鸡蛋，分离出蛋黄液，用双蒸水将卵黄液按1∶8-10稀释，调节pH值为5.0-5.2之间，搅拌均匀，0-4℃放置10h-12h，然后以16000-20000g/min低温超速离心10-20min，上清液经超滤浓缩，即为卵黄抗体水提物；

②硫酸铵盐析法

在卵黄抗体水提物中加入硫酸铵至35-45％饱和度，充分混匀，0-4℃放置6-10h，离心后弃上清，沉淀即为IgY盐析物；

③嗜硫色谱法

先以pH 7.4-7.6的含0.5-0.7M Na₂SO₄的15-25mM PBS平衡HiTrap IgYPurification HP色谱柱，将IgY盐析物用上述缓冲液溶解后过0.45μm滤膜，通过自动进样阀上样，洗脱未结合组分后，换用pH 7.4-7.615-25mM PBS(不含Na₂SO₄)进行洗脱，流速1ml/min，检测波长280nm，收集洗脱峰，经脱盐处理后冻干，即得本发明的抗白唇竹叶青蛇毒卵黄抗体。

2.根据权利要求1所述的抗白唇竹叶青蛇毒卵黄抗体的制备方法，所述的取成年白唇竹叶青蛇的蛇毒是通过咬皿法取毒，冷冻干燥后低温保存。

3.根据权利要求1所述的抗白唇竹叶青蛇毒卵黄抗体的制备方法，所述的将抗原注射到产蛋母鸡中包括如下步骤：将白唇竹叶青蛇毒与弗氏佐剂按1∶1(v/v)充分乳化后，取22周龄产蛋莱航母鸡，经鸡双翼、胸、腹部和背部皮下多位点注射；初次免疫剂量为0.33mg/只，于免疫后的14d、22d后改为不完全弗氏佐剂进行2次加强免疫，免疫剂量分别为0.66mg/只、1.32mg/只；免疫后每日收集鸡蛋，编号后于4℃保存。

4.根据权利要求1所述的抗白唇竹叶青蛇毒卵黄抗体的制备方法，所述的抗白唇竹叶青蛇毒卵黄抗体在非还原性SDS-PAGE条件下分子量约为200KDa，在还原状态下显示该抗体包括重链和轻链。