[发明专利]一种检测抗生素培氟沙星的分子印迹传感器及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于抗生素快速检测技术领域，具体是基于分子印迹特异性识别作用，用于检测抗生素培氟沙星的分子印迹传感器及其制备方法。

背景技术

培氟沙星是氟喹诺酮类抗生素的一种，氟喹诺酮类抗生素是喹诺酮类的衍生物。在过去的十几年中作为抗菌药物广泛地被用于预防和治疗人体及动物的传染性疾病。过量的使用会导致培氟沙星在动物组织中残留，使之产生耐药性和一些不良反应。而培氟沙星在食品中的残留也引起了人们的关注。由于此类药物可以通过乳汁分泌出来，因此牛乳中此类抗生素的残留也成为了人们较为关注的问题，同时培氟沙星也可以引起人体的一些不良反应，如头晕、恶心、以及一些过敏症状如皮疹、皮肤瘙痒等。由于它能够引起一些病原菌的抗性和人体可能的过敏反应，会对人体健康造成一定的危害，因此氟喹诺酮类抗生素在食品中的残留，尤其是一些日常动物源类食用产品如牛奶、鸡肝、鸡蛋等产品的安全问题引起了人们的高度重视。

我国农业部规定各种兽药针对不同种类动物的用法、用量和撤退周期，氟喹诺酮类的撤退周期为28天，牲畜在服用氟喹诺酮类抗生素至少28天以后才能够屠宰用于食品。为了检测氟喹诺酮类抗生素的残留量和保证消费者的权益，建立一种能够快速，灵敏、简单，同时能够实现批量检测的方法就显得尤为重要。

传统检氟喹诺酮类抗生素的方法主要有液相色谱法、气象色谱法、酶联免疫法、气象色谱-质谱法、液相色谱-质谱法等，酶联免疫法虽然灵敏度高，但是，建立该方法需要复杂的过程包括抗原、抗体的制备，同时因其具有生物活性，因此在操作及储存过程中条件也较为严格。对于色谱检测方法，重点在于前处理，前处理过程容易造成目标物质流失，且仪器昂贵需要专业人员操作，也限制了其应用。

因此，建立一种灵敏、快速、简便、特异性高且经济的检测方法是生产经营企业、质控人员、进出口检商、政府管理部门的迫切需要也是对食品、环境安全的有力保障。

发明内容

本发明将分子印迹与电化学传感器相结合，提供了一种用于检测培氟沙星的特异性分子印迹传感器制备方法，是以培氟沙星为模板，在金电极表面通过巯基苯胺及金纳米粒子，及培氟沙星之间的相互作用而制备的传感器。

试剂与仪器

电化学工作站(PASST0N 302N，荷兰，瑞士万通)，恒温培养箱(GRP-9050，上海森信实验仪器有限公司)，无水乙醇、乙酸、甲醇、均为分析纯(国药集团)。培氟沙星(PEF)、恩诺沙星、环丙沙星、氟哌酸(中国兽医药品检查所)，对巯基苯胺(P-ATP)、氯金酸、四丁基高氯酸铵(上海源叶生物科技有限公司)

本发明所制备的电化学分子印迹电化学传感器与传统的免疫传感器相比具有如下优势：制备方法简单，特异性强；可重复使用；性质和结构稳定，无生物活性，机械强度强；成本低，具有良好的实用前景。

附图说明：

图1分子印迹传感器制备流程

图2为经不同方式修饰后的电极的循环伏安图

1a为裸电极；1b为未去除培氟沙星后的电极；1c去除培氟沙星后的电极

具体实施方式

实施实例1培氟沙星分子印迹电化学传感器的制备

1、电极抛光

取两根直径为2mm的金电极，将其置于Piranha溶液中浸泡15min后，分别用0.3μm、0.05μm的Al₂O₃抛光粉打磨后，在无水乙醇、超纯水中各超声5min，在-0.3-1.2V，50mv/s循环扫描至得到稳定的循环伏安图。

2、电极自主装

将抛光好的电极，置于50mmol/L的巯基苯胺乙醇溶液中室温孵育24h，之后分别用无水乙醇和超纯水清洗以去除未被金电极吸附的巯基苯胺。

3、培氟沙星吸附

将经巯基苯胺修饰的金电极，置于含有10mmol/L的培氟沙星溶液中，室温孵育2h，之后再分别用无水乙醇和超纯水分别清洗，吹干备用。

4、电镀聚合将经培氟沙星修饰的电极，浸入含有10mmol/L对巯基苯胺，50mol/L四丁基高氯酸铵，10mol/L培氟沙星和0.2g/L高氯酸溶液中，在-0.3-1.2V，50mv/s，扫描10圈，之后将此电极在含有0.2mol/L的盐酸的甲醇水溶液中浸泡1h，以除去模板分子培氟沙星，从而制备成传感器。

5、对照传感器制备

为确定所制备分子印迹电化学传感器对培氟沙星具有特异性识别性能，同时制备了非印迹的分子印迹电化学传感器，制备方法除不加模板分子培氟沙星以外，其余步骤均与印迹传感器相同。