[发明专利]用于检测黄瓜疫霉的LAMP引物及含有该引物的试剂盒

权利要求书

1.用于检测黄瓜疫霉（Phytophthora melonis）的LAMP引物组，其特征在于，其包括：

外侧正向引物F3：5’-CGGCGACTGGCTGCTA-3’；

外侧反向引物B3：5’-ATTACGTATCGCAGTTCGCA-3’；以及

内侧正向引物FIP：5’-CAAGAATGGGTTTAAAAGGTGGGCATGGCGATTGGTTTGGG-3’；

内侧反向引物BIP：5’-TTACTGAATATACTGTGGGGACGAAAGTCTTTCCTAGACATCCACTGCTGAAAG-3’。

2.含有权利要求1所述LAMP引物组的用于检测黄瓜疫霉的试剂盒。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括dNTPs、Bst DNA聚合酶、PCR反应缓冲液中的一种或多种。

4.根据权利要求2或3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括标准阳性模板。

5.权利要求1所述LAMP引物组或权利要求2-4任一项所述试剂盒在检测黄瓜疫霉中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：

1）提取样品中的DNA；

2）以步骤1）中提取的DNA为模板，进行LAMP-PCR扩增反应；

3）分析PCR产物。

7.根据权利要求5或6所述的应用，其特征在于，PCR反应体系以40μl计为：

其中，检测基础液成分为：Tris-HCl(pH8.8)50mM，KCl 25mM，MgSO₄ 20mM，(NH₄)₂SO₄ 25mM，吐温20 0.2%，甜菜碱2M，dNTPs各3.5mM；稳定液为矿物油。

8.根据权利要求5或6所述的应用，其特征在于，LAMP-PCR反应条件为：65℃60分钟，80℃2分钟，冰上终止反应。