[发明专利]红芪多糖4及其有效成分的制备和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种中药提取物，具体地，涉及红芪多糖4、红芪多糖4的有效成分及其制备和应用。

背景技术

红芪(Radix Hedysari)系豆科岩黄芪属植物多序岩黄芪( Hedysarum polybotrys Hand. -Mazz)的根. 为甘肃特产名贵药材，中医将其作为传统中药，在临床上其具有强心，降糖，利尿，抗病毒，抗衰老等功效。红芪多糖作为其主要活性成分之一，其中HPS4部分具有较明显的抗肿瘤、抗凝血及体外抗氧化等作用。

目前国内外对红芪的化学成分已有了较详细的报道，而对于红芪多糖研究，还只是停留在一级结构及一些药理作用的研究。1997年兰州大学的刘方明从红芪中提取分离出一种均多糖-葡聚糖，并对其结构进行研究；李世刚等通过葡聚糖凝胶柱层析分离纯化得到3个HPS组分，仅用气相色谱法分析了3个HPS组分的单糖组成，并对HPS体外抗肿瘤活性及构效关系进行研究；2009年马守军等对甘谷红芪酸性多糖的纯化及结构进行了初探。马丹等通过分步醇沉法和凝胶柱色谱获得HPS-3均一组分气相色谱法测定其组成。石义凯等研究了水提醇沉法得到的硫酸酯多糖—红芪多糖SHG的结构，多糖作为生物高分子化合物，药理活性，与其理化性质密切相关，因此，了解其理化性质显得尤为重要。 

近年来国内学者相继报道了马勃多糖、当归多糖、黄精多糖、徐长卿多糖、青蒿多糖、白芍多糖、银杏叶多糖以及女贞子多糖等中药多糖具有抗肿瘤作用。对于红芪多糖的抗肿瘤作用国内外报道较少。李世刚等报道，红芪多糖可诱导人胃癌MGC- 803细胞、肝癌HEP-G2细胞凋亡；王希玉等报道红芪多糖具有体内抗肿瘤作用。但是，对于红芪多糖4、红芪多糖4的有效成分相关方面的研究还未见报到。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有的缺陷，提供了红芪多糖4、红芪多糖4的有效成分及其制备和应用。本发明制备的红芪多糖4及其有效成分具有抗肿瘤、抗凝血、抗氧化、抗衰老、降血糖、降血脂、提高机体免疫力、抗辐射的作用。

为了解决上述技术问题，本发明提供了如下的技术方案：

红芪多糖4及其有效成分的制备方法，包括以下步骤：

（1）红芪药材粉碎后，5～20倍水量在40～100℃下浸泡1～5次，每次1～3h；合并浸泡液，浓缩至比重为1.01～1.30；浓缩液用终浓度为20～85%乙醇沉淀，过滤，得沉淀；取上述沉淀复溶于水中，再用终浓度为20%～85%乙醇沉淀，取上清液，浓缩，干燥，得红芪粗多糖；

（2）红芪粗多糖经Sevag法脱蛋白或不脱蛋白，双氧水脱色或不脱色素，得红芪多糖4，红芪多糖4溶液浓缩至多糖含量为0.1~2mg /mL或溶解于水，先用终浓度为20%～85%乙醇沉淀1～5次，再用终浓度为20%～85%乙醇沉淀1～5次，取沉淀，干燥，得红芪多糖4-1和红芪多糖4-2；

（3）红芪多糖4-1经Sephadex G-200柱色谱，以0.05 mol·L^-1 的NaAc-HAc缓冲液洗脱，洗脱溶液的pH值保持4.0～8.0，苯酚-硫酸法示踪，得到两个均一组分：红芪多糖4-1A、红芪多糖4-1B；红芪多糖4-2经DEAE-52柱色谱，以0～2.0 mol·L^-1的NaCl梯度洗脱得到一个均一组分红芪多糖4-2A。

红芪多糖4-1A具有以下结构式Ⅰ：

其中，n=5~40。HPS4-1A构象为无规则线团，重均分子量Mw为20～73.86kDa，均方根旋转半径Rg为20～50nm ，多分散系数Mw/Mn为1.000～1.300； 各单糖组成的摩尔比例为：鼠李糖（Rha）:阿拉伯糖（Ara）:葡萄糖（Glc）:半乳糖（Gal）=1～100:2～100:1～100:2～100，多糖含量为50～100%； 主链骨架由1,5、1,3,5-α-L-Araf和1,6、1,2,6-α- D-Galp组成，侧链分支点位于阿拉伯糖的3位与半乳糖的2位。侧链分支由1,4、1,4,6-α- D-Glcp，1,2、1,2,4-α-L-Rhap组成。主链非还原末端连接主要是阿拉伯糖。

红芪多糖4-1B具有以下结构式Ⅱ：