[发明专利]猪伪狂犬病病毒强毒株、其基因缺失疫苗株及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一株病毒强毒株以及在其基础上获得的基因缺失疫苗株，尤其涉及一株猪伪狂犬病病毒强毒株HeN1、由该强毒株HeN1缺失gE基因获得的基因缺失疫苗株rPRV-gE^--EGFP⁺，本发明还涉及HeN1和疫苗株rPRV-gE^--EGFP⁺在预防或治疗猪伪狂犬病中的应用，本发明属于生物医药领域。

背景技术

伪狂犬病（Pseudorabies，PR又名Aujeszky's disease，AD)是由伪狂犬病病毒(Pseudorabies Virus，PRV)引起的多种家畜、野生动物、伴侣动物和实验动物的一种急性传染病。在自然条件下，本病最常见于猪、牛、羊、犬、猫和鼠类。伪狂犬病病毒除对猪以外，对所有易感动物都是致死性病程。对猪主要表现为神经症状、流涎、呼吸困难、繁殖障碍、生长停滞、失重及高死亡率。哺乳仔猪感染伪狂犬病的临床表现最为典型、严重和一致，均出现神经症状、麻痹、衰竭死亡，死亡率几乎高达100%；随着年龄增长死亡率逐渐下降，成猪仅为2%，但一般情况下成猪感染不发病，而呈隐形经过，仅见打喷嚏、咳嗽、体温升高等轻微症状；妊娠母猪感染伪狂犬病毒可引起流产、死胎、产弱仔和木乃伊化胎儿；对公猪可引起睾丸鞘膜炎。该病具有高度的传染性，一旦在猪群中发现，将很快通过空气和接触经呼吸道传播给其他猪只和猪场，近来的研究表明伪狂犬病病毒还可以通过乳汁和生殖道感染。

在规模化猪场，PR是常规免疫防控对象。利用强弱毒鉴别ELISA进行的血清流行病学调查发现，基因缺失疫苗免疫后仍有一定比例的猪场和猪只存在野毒抗体，并偶有病毒分离的报道。由于造成的经济损失有限，并未引起足够重视。但近一年来，有多个使用常规疫苗免疫的规模化猪场出现了疑似PR流行的现象，主要表现为母猪产弱仔、死胎，仔猪出现神经症状及死亡等。将送检的组织进行PCR鉴定和病毒分离，证明猪场确实存在PRV野毒感染。目前本实验室已经从河南、黑龙江、吉林、辽宁、内蒙古等省猪场送检的病料中检测到PRV野毒。由于PRV基因组较大，约145kb，我们从各猪场送检样品中通过PCR扩增PRV的gE基因进行了测序，结果表明各猪场流行毒株的这两个基因高度同源，同源性在99%以上，与PRVKaplan株（匈牙利，GenBank登录号JQ809328）同源性最低，为97.5%。

免疫接种是防控PRV的最有效方法。我国于上世纪70年代从匈牙利引进了PRVBartha k61株，该病毒是世界上公认的优良疫苗株，国内规模化猪场大都应用该疫苗，PR也得到了很好的控制。但现在的情况是，PR发病猪场都按照常规程序免疫过该疫苗，是否新流行毒株存在抗原变异导致免疫猪不能有效抵抗该病毒？我们利用血清中和试验和绵羊的免疫接种试验证实，Bartha k61免疫猪产生的中和抗体不能有效中和新分离病毒，而且免疫Bartha k61的绵羊也不能完全抵抗新病毒的攻击。因此急需开发新的安全有效的PRV疫苗以应对新流行的毒株。

发明内容

本发明目的之一是提供一株猪伪狂犬病病毒强毒株。

本发明目的之二是提供一株由该猪伪狂犬病病毒强毒株经基因工程方法缺失gE基因并插入EGFP标记的弱毒疫苗株，用该弱毒疫苗株所制备的疫苗对于PRV新流行毒株具有良好的保护效力。

本发明目的之三是提供一种预防或治疗猪伪狂犬病的疫苗组合物。

本发明的上述目的分别是通过以下技术方案来实现的：