[发明专利]一种检测BAALC基因mRNA表达量的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域的荧光定量PCR技术，特别涉及一种检测BAALC基因mRNA表达量的试剂盒。

背景技术

急性髓细胞性白血病（Acute myeloid leukemia，AML）是一种临床分子异质性恶性克隆性疾病，是急性白血病中最常见的类型，其治疗效果差，化疗后完全缓解率为60%-70%，中位生存期约为2年。在美国每年有超过11,900新病例发生，AML的患者大多是中老年人，患者的平均年龄为65岁，其中儿童病例少于10％。大约一半的成年AML患者缺乏染色体畸变，虽然这些患者有一个较长的预后期，但是只有40%能长期存活下来。分子技术能准确区别患者危险程度，从而提高治疗效果。最新研究发现AML患者中存在BAALC（Brain And Acute Leukemia，Cytoplasmic；脑和急性髓系白血病，胞质）基因的异常高表达，经进一步研究，得知显示其表达的水平与预后存在关系。

BAALC基因是一种早期造血细胞祖细胞的标志，在某些急性白血病患者中异常表达，该基因定位于染色体8q22.3，其DNA序列和表达在哺乳动物中高度保守，主要表达在神经外胚层来源的组织及造血前体细胞中，成熟的骨髓和外周血单个核细胞不表达，编码的蛋白不与任何已知的蛋白或功能域同源，其功能尚不清楚。在造血干细胞中，BAALC基因的表达仅限于祖细胞。急性髓系白血病(AML)、急性淋巴细胞白血病(ALL)及慢性粒细胞白血病(chronic myelogenous leukemia，CML)急变期患者有BAALC基因的表达，而CML慢性期及慢性淋巴细胞白血病(chronic lymphocytic leukemia，CLL)则检测不到。国外研究显示BAALC基因mRNA高表达是正常核型AML(NC，AML)患者预后不良标志。

目前可用于BAALC基因定量表达的方法有探针杂交法、基因芯片法、质谱法、免疫组化法和基因测序法等。探针杂交法假阳性率较高；基因芯片法成本高、制备方法繁琐；质谱法难以在普通医疗机构开展；基因测序法虽敏感性和特异性高，但价格比较昂贵，而且操作较繁琐，耗时较长。虽然免疫组化法的特异性和敏感性都比较高，但实时荧光定量PCR（Polymerase Chain Reaction，聚合酶链式反应）与免疫组化法相比具有更强的特异性、更高的灵敏度而且检测快速、降低了污染，但目前尚未有实时荧光定量PCR方法检测急性髓细胞性白血病中BAALC基因的相关报道。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明实施例提供了一种检测BAALC基因mRNA表达量的试剂盒。所述技术方案如下：

一种检测BAALC基因mRNA表达量的试剂盒，包括检测用引物、荧光探针、cDNA第一链合成试剂、荧光定量PCR混合液、阴性对照和阳性对照，所述检测用引物、荧光探针包括BAALC基因引物、内参基因ABL引物及Taqman荧光探针，其中：

BAALC基因上游引物序列如序列表中SEQ ID NO:1所示；

BAALC基因下游引物序列如序列表中SEQ ID NO:2所示；

BAALC基因Taqman荧光探针如序列表中SEQ ID NO:3所示；

ABL基因上游引物序列如序列表中SEQ ID NO:4所示；

ABL基因下游引物序列如序列表中SEQ ID NO:5所示；

ABL基因Taqman荧光探针如序列表中SEQ ID NO:6所示；

所述cDNA第一链合成试剂含有MgC1₂、逆转录酶缓冲液、dNTPs、RNA酶抑制剂、Oligo(dT)₁₅、AMV逆转录酶和无RNase去离子水；所述荧光定量PCR混合液含有PCR预混合液、Mg²⁺、dNTPs、dUTP、Taq酶、UNG酶和无RNase去离子水。

进一步地，所述试剂盒还包括内部阳性控制序列、内部阳性控制序列的引物和Taqman荧光探针，其中：内部阳性控制序列如序列表中SEQ ID NO:7所示；内部阳性控制序列的上游引物如序列表中SEQ ID NO:8所示；内部阳性控制序列的下游引物如序列表中SEQ ID NO:9所示；内部阳性控制序列的Taqman荧光探针如序列表中SEQ ID NO:10所示。