[发明专利]基于核酸适体荧光探针的糖化血红蛋白试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种基于核酸适体荧光探针的糖化血红蛋白试剂盒，其特征在于，主要成分包括：含NH₄Cl、Tris、EDTA-Na₂的红细胞裂解液；含 MgCl₂的0.2M磷酸缓冲液；糖化血红蛋白标准品；糖化血红蛋白核酸适体荧光探针；所述糖化血红蛋白核酸适体荧光探针为5'和3'两端分别标记荧光芘分子单体的核苷酸单链，该核苷酸单链序列为SEQ ID NO:1~SEQ ID NO:4中的任意一条DNA片段序列，其序列为：

SEQ ID NO:1：gggaggcatg tgtgctaagg cgtagcaggg ttggaaccc；

SEQ ID NO:2：gggaggcatg tgatttaagg cgcggcagat gttggaaccc；

SEQ ID NO:3：gggaggcatg agacctatgg cgttgcattg gttggaaccc；

SEQ ID NO:4：gggaggcatg ggaaacaatg cgccgcagag ttggaaccc。

2.根据权利要求1所述的一种基于核酸适体荧光探针的糖化血红蛋白试剂盒，其特征在于，所述含NH₄Cl、Tris、EDTA-Na₂的红细胞裂解液为含有1～280 mmol/L NH₄Cl, 1~34 mmol/L Tris,1~2mmol/LEDTA-Na₂, pH 7.0~7.2；所述含 MgCl₂的0.2M磷酸缓冲液为含有1~10mmol/L MgCl₂。

3.根据权利要求1或2所述的一种基于核酸适体荧光探针的糖化血红蛋白试剂盒，其特征在于，所述含NH₄Cl、Tris、EDTA-Na₂的红细胞裂解液、含 MgCl₂的0.2M磷酸缓冲液、糖化血红蛋白标准品、糖化血红蛋白核酸适体荧光探针为配制好直接使用的液体试剂或是使用前需加水溶解的干粉状态。

4.根据权利要求1~3所述的一种基于核酸适体荧光探针的糖化血红蛋白试剂盒，其特征在于，该试剂盒用于检测肝素抗凝全血或末梢血中的糖化血红蛋白浓度。

5.一种用权利1~3任一所述基于核酸适体荧光探针的糖化血红蛋白试剂盒来检测糖化血红蛋白浓度的方法，其特征在于，方法步骤包括：

（1）血样裂解：将血样和含NH₄Cl、Tris、EDTA-Na₂的红细胞裂解液按1:0.5~5体积比混匀，静置5~30min，再中速离心5~10min，收集上清液；

（2）混合卵育：取20~100μl步骤1）得到的上清液和30~50ul的用含 MgCl₂的0.2M磷酸缓冲液，溶解糖化血红蛋白核酸适体荧光探针得到的糖化血红蛋白核酸适体荧光探针试剂混合，室温下卵育5~15min，使糖化血红蛋白核酸适体荧光探针与血样充分结合，得到测试液；

（3）荧光检测：荧光检测仪检测步骤2）得到的测试液50ul，在荧光检测仪荧光激发后，读取荧光激发后20至100ns时间段内波长在480~500nm的荧光值；

（4）结果计算：使用生物医学作图软件，参照糖化血红蛋白标准样品制作的标准曲线，结合步骤3）中检测到的荧光值计算出血样中糖化血红蛋白的浓度。