[发明专利]一种弧菌交叉保护性抗原及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程及免疫学领域，具体地说，涉及一种弧菌交叉保护性抗原及其制备方法和应用。

背景技术

弧菌属(Vibrio)广泛分布于自然界，尤以水中为多，有100多种。主要致病菌可引起霍乱或食物中毒。

弧菌的外膜蛋白在其致病过程起着非常重要的作用，是一种良好的免疫原；孔蛋白作为主要的外膜蛋白之一，是弧菌交叉保护性疫苗的热门研究对象也是弧菌高效免疫原的热门研究对象。一些孔蛋白如OmpK、OmpU和OmpV，其基因序列在弧菌中具有很好的保守性，作为抗原时，具有良好的免疫原性和免疫保护性，而OmpK更是被证明具有良好的交叉保护性。

麦芽糖孔蛋白(maltoporin)，是一个与麦芽糖、麦芽糊精的运输相关的孔蛋白。根据其噬菌体的受体特性命名为LamB。LamB蛋白质的生理功能和蛋白结构研究比较成熟，但是其免疫学性质研究较少，未见到有LamB蛋白作为抗原的相关报道。评价弧菌LamB基因序列的保守性，免疫原性和交叉免疫保护作用，将有助于探讨开发弧菌麦芽糖孔蛋白LamB作为交叉保护性抗原的应用价值。

发明内容

本发明的目的是提供一种弧菌交叉保护性抗原及其制备方法和应用。

为了实现本发明的目的，本发明将弧菌的麦芽糖孔蛋白编码基因LamB经过基因克隆、原核表达和产物制备，得到重组的麦芽糖孔蛋白LamB，该重组蛋白可以作为弧菌的交叉保护性抗原应用到水产养殖中。

本发明的目的是提供一种麦芽糖孔蛋白编码基因LamB，该基因具有如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7或SEQ ID NO.8所示的核苷酸序列。

本发明根据已有的LamB序列，设计简并引物获得了溶藻弧菌ATCC33787（Vibrio alginolyticus）、副溶血弧菌ATCC17802（Vibrio parahaemolyticus）、副溶血弧菌VPL4-90（Vibrio parahaemolyticusVPL4-90）、拟态弧菌ATCC33653（Vibrio mimicus）、非01霍乱弧菌（Vibrio cholerae Vb0）、河弧菌ATCC33810（Vibrio fluvialis）、弗尼斯弧菌ATCC33813（Vibrio furnissii）和哈维氏弧菌NBRC15634（Vibrio harveyi）的基因LamB。

简并引物序列如下：

LamB-F:5'-ATGAAAAAAGTAAGTSNYATTGCAG-3'

LamB-R:5'-TTACCACCAAGCTTCNRCTTG-3'

其中，S=C/G；N=A/C/G/T；Y=C/T；R=A/G；

其中，溶藻弧菌ATCC33787的基因LamB的核苷酸序列如SEQID NO.1所示，副溶血弧菌ATCC17802的基因LamB的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，副溶血弧菌VPL4-90的基因LamB的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，拟态弧菌ATCC33653的基因LamB的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，非01霍乱弧菌的基因LamB的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，河弧菌ATCC33810的基因LamB的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示，弗尼斯弧菌ATCC33813的基因LamB的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，哈维氏弧菌NBRC15634的基因LamB的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示。

溶藻弧菌ATCC33787、副溶血弧菌ATCC17802、拟态弧菌ATCC33653、河弧菌ATCC33810、弗尼斯弧菌ATCC33813和哈维氏弧菌NBRC15634六株弧菌为标准菌株，保藏于美国模式培养物集存库ATCC和日本技术评价研究所生物资源中心NBRC。副溶血弧菌VPL4-90和非01霍乱弧菌购买于广东环凯微生物科技有限公司。

本发明的目的是提供一种麦芽糖孔蛋白LamB，该蛋白是由上述麦芽糖孔蛋白编码基因编码的。

本发明的目的是提供一种来源于溶藻弧菌ATCC33787的麦芽糖孔蛋白编码基因LamB编码的LamB蛋白，该麦芽糖孔蛋白具有如SEQ ID NO.9所示的氨基酸序列。

本发明的目的是提供一种重组麦芽糖孔蛋白LamB的制备方法，该方法包括如下步骤：