[发明专利]瘦素检测试剂盒

权利要求书

1.一种瘦素检测试剂盒，包括瘦素参考品，包被抗体微孔板，酶标记抗瘦素，洗涤液，显色液，终止液，其特征在于：所述的瘦素参考品为重组人瘦素多肽抗原，所述的包被抗体微孔板和酶标记抗瘦素为重组人瘦素多肽单克隆抗体。

2.根据权利要求1所述的瘦素检测试剂盒，其特征在于：所述的包被抗体微孔板为重组人瘦素多肽抗原单克隆抗体6A5,所述的酶标记抗瘦素为重组人瘦素多肽抗原单克隆抗体3F7。

3.根据权利要求1所述的瘦素检测试剂盒，其特征在于：所述的洗涤液是由28.8g的Na₂HPO₄·12H₂O、80g的NaCl、3.9g的NaH₂PO₄·2H₂O、50ml的Tween-20加入纯化水溶解定容至100000ml。

4.根据权利要求1所述的瘦素检测试剂盒，其特征在于：所述的显色液包括显色液A和显色液B。

5.根据权利要求1所述的瘦素检测试剂盒，其特征在于：所述的终止液为浓度2mol/L的硫酸溶液。

6.根据权利要求3所述的瘦素检测试剂盒，其特征在于，所述的重组人瘦素多肽抗原单克隆抗体由以下步骤制备而成：

（1）以瘦素参考品免疫6-8周雌性Balb/c小鼠；

（2）取上述小鼠的免疫脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0，在浓度为50%的聚乙二醇作用下进行融合得杂交瘤细胞；

（3）将上述融合所得的杂交瘤细胞经选择性培养基HAT培养，并筛选出对重组人瘦素多肽抗原有强阳性反应的杂交瘤细胞，即为单抗细胞株；

（4）取上述状态良好的数对生长期单抗细胞株，吸管吹下细胞，离心处理所得细胞沉淀以无菌生理盐水悬浮调整至浓度为2×10⁷cells/ml的细胞悬浮液；

（5）将上述细胞悬浮液接种至BALB/C小鼠腹腔，0.5ml/只；

（6）7天后观察待小鼠腹部膨大发黑即可抽取小鼠腹水；

（7）将抽取的小鼠腹水经辛酸-硫酸铵沉淀，透析后获粗制单克隆抗体；

（8）再对上述粗制的单克隆抗体进行纯化即可。

7.根据权利要求4所述的瘦素检测试剂盒，其特征在于：所述的显色液A是由浓度为30%过氧化氢用柠檬酸缓冲液稀释至其体积的1000倍所得；所述的显色液B是用含20%二甲基亚砜的柠檬酸缓冲液将四甲基联苯胺配制成0.4mg/ml所得。

8.根据权利要求7所述的瘦素检测试剂盒，其特征在于：所述的柠檬酸缓冲液是由3.4g乙酸钠和5.2g柠檬酸溶于5000ml的纯化水所得。