[发明专利]在动物细胞或动物组织中表达外源基因的方法

权利要求书

1.将外源基因导入哺乳动物细胞或生物个体的组织中进行基因呈递的家蚕杆状病毒载体，其特征在于：包括骨架载体以及重组到骨架载体上的外源基因的表达盒；所述骨架载体是家蚕杆状病毒BmNPV DNA；所述外源基因的表达盒由哺乳动物启动子、外源基因和终止子组成。

2.按照权利要求1所述的家蚕杆状病毒载体，其特征在于：所述哺乳动物启动子是CMV启动子、人巨细胞病毒早期启动子、人延伸因子1-亚基启动子、Rous肉瘤长末端重复序列、人leukosialin基因启动子、鼠3-磷酸甘油激酶l基因启动子、人泛素蛋白C基因启动子、由鸡β-肌动蛋白启动子和CMV增强子序列构成的杂合启动子或鼠乳房瘤病毒启动子；所述的终止子是SV40-polyA尾终止子。

3.按照权利要求1所述的家蚕杆状病毒载体，其特征在于：所述的外源基因是报告基因、抗原基因、治疗遗传病用的相关基因、抑癌基因或RNAi；其中，所述的报告基因是绿色荧光蛋白基因或荧光素酶报告基因。

4.一种构建权利要求1-3任何一项所述家蚕杆状病毒载体的方法，该方法包括：

（1）将外源基因的表达盒克隆到转移载体上，构建得到含有外源基因的重组转移载体；所述外源基因的表达盒由哺乳动物启动子、外源基因和终止子组成；（2）将所构建的含有外源基因的重组转移载体与杆状病毒共转染昆虫细胞，进行同源重组，即得。

5.按照权利要求4所述的方法，其特征在于：

所述的外源基因是报告基因、抗原基因、治疗遗传病用的相关基因、抑癌基因、、或RNAi；其中，所述的报告基因优选是绿色荧光蛋白EGFP基因或荧光素酶报告基因；

所述的转移载体是pVL1393转移载体；

所述哺乳动物启动子是CMV启动子、人巨细胞病毒早期启动子、人延伸因子1-亚基启动子、Rous肉瘤长末端重复序列、人leukosialin基因启动子、鼠3-磷酸甘油激酶l基因启动子、人泛素蛋白C基因启动子、由鸡β-肌动蛋白启动子和CMV增强子序列构成的杂合启动子或鼠乳房瘤病毒启动子；所述的终止子优选是SV40-polyA尾终止子；

所述的杆状病毒是BmNPV、AcMNPV、ApNPV、BsSNPV、CfMNPV、EoSNPV、HaNPV、HzNPV、LdMNPV、MbMNPV、OpMNPV、SlMNPV、SeMNPV或TeNPV；优先为家蚕杆状病毒BmNPV。

所述的昆虫细胞是家蚕细胞。

6.一种将外源基因导入动物细胞或动物个体组织并进行表达的方法，包括：将权利要求1-3所述的家蚕杆状病毒载体感染昆虫宿主或昆虫细胞；培养被感染的昆虫宿主或昆虫细胞对家蚕杆状病毒载体进行扩增；收获并纯化所扩增的产物。

7.按照权利要求6所述的方法，其特征在于：所述的昆虫宿主是家蚕、野蚕、蓖麻蚕、樟蚕、樗蚕、柞蚕、日本柞蚕、野天蚕、苜蓿尺蠖、茶尺蠖、甘兰夜蛾、秋粘虫、粉纹夜蛾、行军虫、棉铃虫、美国棉粘虫、烟青虫、烟草夜蛾、东方粘虫或舞毒蛾；所述的昆虫细胞是家蚕细胞、野蚕细胞、蓖麻蚕细胞、樟蚕细胞、樗蚕细胞、柞蚕细胞、日本柞蚕细胞、野天蚕细胞、苜蓿尺蠖细胞、茶尺蠖细胞、甘兰夜蛾细胞、秋粘虫细胞、粉纹夜蛾细胞、行军虫细胞、棉铃虫细胞、美国棉粘虫细胞、烟青虫细胞、烟草夜蛾细胞、东方粘虫细胞或舞毒蛾细胞；

所述的感染是将家蚕杆状病毒载体通过口食来感染1-5龄的昆虫幼虫或蛹体或透过表皮来感染1-5龄的昆虫幼虫或蛹体；优选的，所述的感染是将家蚕杆状病毒载体感染家蚕细胞或将家蚕杆状病毒载体穿刺接种1-5龄的家蚕幼虫或蛹体，在感染3-6天后收集含重组杆状病毒的家蚕幼虫或蛹的体液或组织匀浆；其中，所述的蛹体优选为1-2天的早期嫩蛹。

8.权利要求1-3所述的家蚕杆状病毒载体在制备基因治疗药物或DNA疫苗中的用途。

9.一种基因治疗药物或DNA疫苗，其特征在于，包括：权利要求1-3所述的家蚕杆状病毒载体和药学上可接受的辅料。

10.一种呈递外源基因的口服制剂，其特征在于：包括基因呈递有效量的权利要求1-3所述的纯化的家蚕杆状病毒载体和终浓度为25-35%的脂肪酸。