[发明专利]一种银杏叶中高纯度黄酮组分的高效提取分离制备方法

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体地说，涉及一种银杏叶中高纯度黄酮组分的高效提取分离制备方法。

背景技术

银杏属银杏科裸子植物，又叫白果树、公孙树，是我国特有的珍贵树种，也是世界上最古老的树种，被称做“活化石”，在我国有着广泛的分布。银杏在我国作为药用已有5000多年的历史，现代医学研究发现银杏叶具有降血脂、清除氧自由基、增强神经系统功能、调节急速水平、抗炎抗过敏等作用，近年来，银杏叶用作保健食品和植物药，广泛用于防治记忆力下降、痴呆及心脑血管疾病。

银杏叶的化学成分较为复杂，其主要有效成分为黄酮和内酯两类。到目前为止，国内外关于银杏叶及其制剂的质量监控方法主要是测定黄酮醇苷和内酯含量，国际标准要求银杏制剂中的银杏黄酮含量大于24%，银杏内酯含量大于6%。关于银杏叶及其制剂中黄酮含量的测定方法，目前都是在水解的基础上，以槲皮素、山奈酚、异鼠李素三种黄酮苷元为对照，利用HPLC方法测定三种苷元的量，再乘以系数2.51计算得到的。这一系数是根据银杏叶总黄酮苷中认为活性强的香豆酰基黄酮醇苷的平均分子量760与苷元的分子量进行换算，是建立在假设银杏叶中所有的黄酮醇苷分子量都是760的基础上，而实际上它只占银杏黄酮的一小部分。为了达到银杏黄酮24%的含量，个别银杏叶提取物会有人为添加芦丁的现象。同时，利用水解的方法测定银杏黄酮的含量，水解时间长，耗时费力，并且水解的条件如盐酸的浓度与加热时间会影响水解的程度，可能会出现水解不完全或水解过度，影响测定结果。

为了提高银杏叶及其制剂的质量，同时能够充分体现银杏叶中黄酮醇苷的真实含量与成分，从而达到在生产和制剂过程中质量均一性，需要发展一种银杏叶提取制备方法，将银杏黄酮有效组分制备出来，明确成分，不需要水解便能直接测得它的真实含量，以此为指标，监测生产中每一步银杏黄酮的含量，可以提高产品的质量及稳定性。

发明内容

针对上述缺陷，本发明提供一种能够将银杏黄酮有效组分制备出来，明确成分，不需要水解便能直接测得它的真实含量，并且提高产品的质量及稳定性的银杏叶中高纯度黄酮组分的高效提取分离制备方法。

为解决上述问题，本发明所采用的技术方案是：

一种银杏叶中高纯度黄酮组分的高效提取分离制备方法，其特征在于：步骤如下：

1）、提取：称取含水量为1%-10%的银杏叶，加入其重量8-12倍，浓度为10%-50%乙醇，20-50℃浸泡提取2-5次，每次1-5天，合并提取液，将提取液浓缩得到相对密度为1.15-1.25的浸膏；

2）、醇沉：将浸膏中加入乙醇使乙醇体积浓度达到50-70%，并充分搅拌，0-4℃冷藏静置12-36小时，过滤，将滤液浓缩至相对密度为1.10-1.25的浸膏；再加入乙醇使乙醇体积浓度达到70-90%，并充分搅拌，0-4℃冷藏静置12-48小时过滤，将滤液浓缩挥发除去乙醇，浓缩得到相对密度为1.15-1.25的浸膏；

3）、水沉：将醇沉完的浸膏中按照1:5-1:10的体积比加入水，充分搅拌，0-4℃冷藏静置24-240小时，过滤，样品溶液经过10000-25000转/分钟的高速离心机离心，样品浓缩至相对密度为1.05-1.10的浸膏；

4）、大孔树脂分离：将水沉完的浸膏上样于非极性大孔树脂柱，上样量与分离材料体积比为1：5-1：50，分别采用不同体积浓度的乙醇水溶液作为洗脱液，分别采用水、体积浓度10-30%乙醇、体积浓度30-60%乙醇和60-90%乙醇洗脱，每次洗脱的体积为3-6个柱体积，流速为1-3个柱体积/小时；收集10-30%乙醇和60-90%乙醇洗脱组分，合并洗脱液并浓缩至相对密度为1.10-1.20的浸膏；

5)、新型硅胶基质键合材料的二维液相色谱制备：以粒径10-100微米的新型硅胶基质键合材料为填料，以不同体积浓度的甲醇水溶液作为洗脱液，收集目标洗脱组分为一维组分，再以粒径为5-80微米的新型硅胶基质键合材料为填料，以不同体积浓度的甲醇水溶液作为洗脱液，收集目标洗脱组分为二维组分，干燥处理即为银杏黄酮组分化合物。

进一步地说：

所述步骤3）中，提取物水沉工艺结束后，先通过转速为10000-25000转/分钟的高速离心机离心，再进行大孔树脂分离。

更进一步地说：

所述步骤4）中，大孔树脂的型号为非极性聚苯乙烯型，大孔树脂分离洗脱时，其目标组分采用体积浓度为10-30%乙醇和60-90%乙醇溶液洗脱，并将两种洗脱液合并浓缩。

更进一步地说：