[发明专利]一种模拟移动床色谱分离制备24-去氢胆固醇的方法

说明书

技术领域

本发明涉及药物的加工提取领域，尤其涉及一种利用模拟移动床色谱分离纯化24-去氢胆固醇的方法。

背景技术

24-去氢胆固醇(分子结构如式I)又名3β-羟基-5，24-胆甾二烯、链甾醇，为白色或近白色的晶体或粉末，不溶于水，溶于正己烷、石油醚等非极性溶剂，易溶于醇类等极性较大的溶剂。

24-去氢胆固醇和胆固醇的分子结构非常相似，不仅具有胆固醇的一些生理作用，还是重要的医药中间体，在作为许多具有生理活性的甾类化合物的合成初始原料上比胆固醇更有优势，可以广泛应用于医药、化工、生化等领域。例如24-去氢胆固醇在24位多一个双键，在25位上少了一个羟基，将双键打开，增加一个羟基是一个较容易实现的合成反应。因此，24-去氢胆固醇是制备25-羟基维生素D3关键中间体25-羟基胆固醇的最佳原料。

24-去氢胆固醇可通过有机反应全合成或半合成得到，也可从动植物中提取分离得到。前者往往因起始物难获得或反应步骤长，收率低而不具工业价值。后者通常采用溶剂提取技术可以获得去氢胆固醇粗品，但纯度都较低，不符合商业用要求，因此需进一步分离纯化。

目前关于24-去氢胆固醇分离纯化的报道有传统的合成转化法(US Patent 3846455)、AgNO₃络合色谱法(US Patent 3803184)、硅胶柱层析法(Sheu J H，Huang S Y，Duh C Y.J.Nat.Prod.，1996，59(1)：23～26)、高效液相色谱法(Hansbury E，Scallen T J.J.Lipid Res.，1978，19(4)：742～745)和最近发展的溶剂结晶法(CN101307086)、萃取法(CN101270141)和固定床吸附法(CN101307087)。

其中，合成转化法采用汞盐把24-去氢胆固醇转化成25-羟基胆固醇后再层析或结晶、皂化才能得到较高纯度的24-去氢胆固醇，其方法较为繁琐，且汞离子毒性大，不利于工业生产，还易造成污染。AgNO₃络合色谱法比较费时费钱，也难以工业化。硅胶柱层析法分离时间长、效率低。HPLC法采用C₁₈反相柱，以乙腈、乙腈-甲醇或甲醇溶液为流动相，可以分离得到24-去氢胆固醇、胆固醇及7-去氢胆固醇等许多甾醇，但它们仅适合分析样品的制备。溶剂结晶法、萃取法和固定床吸附法具有生产成本低、污染少的特点，适于工业化生产，但经过活性炭吸附或不同溶剂多次结晶得到的24-去氢胆固醇产品纯度通常仍低于90％，还含有大量其它结构相近的未知杂质，达不到24-去氢胆固醇产品的高纯度要求。

因此，有必要开发可得到高纯度的24-去氢胆固醇产品并适用于工业化生产的纯化技术。

发明内容

针对现有技术中24-去氢胆固醇产品的分离提纯过程中效率低、产品纯度低的问题，本发明提供一种自动化程度高、效率高的分离提纯24-去氢胆固醇的方法。

一种模拟移动床色谱分离制备24-去氢胆固醇的方法，以羊毛脂中提取得到的24-去氢胆固醇粗品作为原料，以粒径为5-100μm的十八烷基硅烷键合硅胶作为模拟移动床色谱的固定相，以甲醇水溶液作为模拟移动床色谱的流动相。

模拟移动床色谱把一根长的色谱柱分成若干短的色谱柱，各柱之间首尾相连，由进料点(对应进料液流量U_p)、两个采出点(分别对应提取液流量U_X和提余液流量U_R)以及洗脱液输入点(对应洗脱液流量U_E)把所有的色谱柱分成了4个区。本发明所述的模拟移动床色谱由4～32根色谱柱组成，色谱柱分四个区域，每区由1～8根相同的色谱柱串联形成。

T_s为给定的一个切换时间，选择好进料点、两个采出点和洗脱液输入点，在经过了T_s时间后各点分别沿着溶液流动的方向，向下一个柱子推移，这样循环往复就形成了固定相向相反方向的虚拟流动，从而实现了与真实移动床色谱相近的分离效果。具体包括如下步骤：

(1)将24-去氢胆固醇粗品溶于流动相，配成一定浓度的进样液，使用模拟移动床色谱系统经两次分离，分别除去24-去氢胆固醇以外的强、弱吸附杂质组分，得到纯化的24-去氢胆固醇溶液；

(2)纯化的24-去氢胆固醇的溶液经浓缩、蒸除溶剂后得到纯度高的24-去氢胆固醇产品。