[发明专利]一种猪环曲病毒RT-PCR检测试剂盒及其检测方法无效
| 申请号： | 201210398440.8 | 申请日： | 2012-10-10 |
| 公开（公告）号： | CN102952898A | 公开（公告）日： | 2013-03-06 |
| 发明（设计）人： | 朱玲;徐志文;周璐 | 申请（专利权）人： | 四川农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 625014 四*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 种猪 病毒 rt pcr 检测 试剂盒 及其 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种猪环曲病毒RT-PCR检测试剂盒，其特征在于，按照每个试剂盒检测20个样品计，每次检测样品时设阳性、阴性对照，试剂盒组成包括：
阳性对照模板：对猪环曲病毒的阳性样品抽提RNA，逆转录后获得的cDNA，共20ul，每次1ul；
阴性对照样品：SPF猪粪便样品和PBS按SPF猪粪便样品的重量∶PBS的体积＝0.5～1.0∶1加入PBS混匀，3000r/min离心15min，
取上清液抽提RNA，逆转录后获得的cDNA，共20ul，每次用1ul；
上游引物P1：5’-ACCCCTGCCTGAGGTTTCYTT-3’，下游引物P2：5’-AGCACGACGTTGTCTRCGTGT-3’，上游引物P1和下游引物P2浓度均为10pmol/ul，各30ul，每个样品各用0.5ul；
2×Taq PCR Master Mix：300ul，每个样品用10ul；
ddH2O：200ul，每个样品用8ul。
2.根据权利要求1所述的猪环曲病毒RT-PCR检测试剂盒的检测方法，其特征在于，反应体系：2×Taq PCR Master Mix 10ul、ddH2O 8ul、上游引物P1、下游引物P2各0.5ul、反转录模板1ul；PCR反应条件：95℃1min，95℃5s、50℃10s、72℃30s反应30个循环，最后72℃延伸3min。
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