[发明专利]一种胶乳免疫比浊法进行幽门螺杆菌抗体检测的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及应用基因重组抗原制备胶乳免疫试剂以及含有该试剂的胶乳免疫比浊法进行幽门螺杆菌抗体检测的试剂盒。

背景技术

幽门螺杆菌，Helicobacter pylori，简称Hp，由巴里·马歇尔（Barry J.Marshall）和罗宾·沃伦（J.Robin Warren）二人首次发现，此二人因此获得2005年的诺贝尔生理学或医学奖。幽门螺杆菌是一种单极、多鞭毛、末端钝圆、螺旋形弯曲的细菌，长2.5～4.0μm，宽0.5～1.0μm。在胃粘膜上皮细胞表面常呈典型的螺旋状或弧形。

幽门螺杆菌感染是慢性活动性胃炎、消化性胃溃疡以及胃黏膜相关淋巴组织(MALT)淋巴瘤的主要致病因素，并且与胃癌的发生密切相关，1994年世界卫生组织/国际癌症研究机构(WHO/IARC)将幽门螺杆菌定为I类致癌原。在亚洲地区，中国内地、中国香港、越南、印度等少年幽门螺杆菌的感染率分别60%、50%、40%、70%，慢性胃炎患者的胃粘膜活检标本中幽门螺杆菌检出率可达80％～90％，而消化性胃溃疡患者更高，可达95％以上，甚至接近100％。胃癌由于局部上皮细胞已发生异化，因此其检出率高低报道不一。幽门螺杆菌的感染已是个世界性问题，对其进行准确诊断有利于控制HP传播与流行及根除HP感染治疗的监测。

1983年通过胃镜取活检标本分离培养成功以来，对幽门螺杆菌感染的诊断已发展出了许多方法，包括有细菌学、病理学、血清学、同位素示踪、分子生物学等。但总的讲来，从标本采集角度看，可以分为侵袭性和非侵袭性两大类。

侵入性方法主要指必需通过胃镜取活检标本检查的方法，是目前消化病学科的常规方法。它包括细菌的分离培养和直接涂片、快速尿素酶试验，药敏试验。

非侵入性方法主要指不通过胃镜取活检标本诊断幽门螺杆菌标本感染的方法。这类方法包括抗体检测、抗原检测、尿素13C/14C呼气试验等。抗体检测目前已有的方法包括酶联免疫法、免疫印迹法、胶体金法和胶乳增强免疫比浊法等，为HP的流行病学调查提供了有利便捷手段。胶乳增强免疫比浊法，是将一定量的抗原或者抗体标记到一定粒径大小的胶乳颗粒上制备成胶乳溶液，与相应的抗体或者抗原溶液混合后会引起抗原抗体反应，而形成一定的浊度，检测浊度的变化从而用以判定抗体或抗原浓度的方法。幽门螺杆菌抗体检测方法则是应用幽门螺杆菌特异性抗原标记胶乳颗粒，从而检测人血清样本中相应抗体含量的一种方法。胶乳增强免疫比浊法使用自动生化分析仪，能够简便、快速、大批量且定量的进行样本检测，对于疾病的防治意义重大。

发明内容

本发明的目的在于克服目前使用天然抗原制备胶乳试剂的缺点，天然抗原之间批次间差异大，且制备过程繁琐、周期长，提供一种使用基因重组抗原制备胶乳免疫试剂盒，以测定幽门螺杆菌抗体以及使用该试剂进行临床样本检测的方法。

为实现本发明的目的，本发明提供一种采用胶乳免疫比浊法检测幽门螺杆菌抗体含量的试剂盒，包含试剂R1、试剂R2、幽门螺杆菌抗体校准品；所述试剂R1为pH值6.5-8.5的缓冲液，所述试剂R2为幽门螺杆菌基因重组抗原胶乳试剂。

作为优选，所述R2试剂中幽门螺杆菌基因重组抗原胶乳试剂与幽门螺杆菌的尿素酶B亚单位UreB、幽门螺杆菌黏附素HpaA、空泡毒素VacA、细胞毒素相关蛋白CagA、热休克蛋白HspB、鞭毛蛋白A亚单位FlaA和B亚单位FlaB中的一种特异性结合。

幽门螺杆菌特异性蛋白抗原包括是尿素酶B亚单位(UreB)、幽门螺杆菌黏附素(HpaA)、空泡毒素(VacA)、细胞毒素相关蛋白(CagA)、热休克蛋白（HspB）、鞭毛蛋白A亚单位(FlaA)和B亚单位(FlaB)等。其中尿素酶B亚单位(UreB)、幽门螺杆菌黏附素(HpaA)、热休克蛋白（HspB）、鞭毛蛋白A亚单位(FlaA)和B亚单位(FlaB)几乎在所有的幽门螺杆菌中都有表达。尿素酶蛋白对细菌在体内的定植及致病发挥着重要作用。尿素酶B亚单位(ureB)是尿素酶的两个亚单位之一，已证实是幽门螺杆菌的一个重要保护性抗原。