[发明专利]一种检测PML-RARa融合基因mRNA表达量的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域的荧光定量PCR技术，具体涉及一种检测PML-RARa融合基因mRNA表达量的试剂盒。

背景技术

急性早幼粒细胞性白血病（Acute Promyelocytic Leukemia，APL）是急性髓性白血病（Acute myeloid leukemia，AML）中的一种亚型，约占成人AML患者的10%~15%，病人常较年轻，年龄多在30~38岁之间，10岁以下者比较罕见。据统计，国内APL发病率高于西方国家的10%左右，占AML的18.7%，部分地区比如东北油田的发病率则高达20%~30%。因此，APL存在年龄、种族与地域的差异。

近十余年来，由于全反式维甲酸和三氧化二砷的应用，采用双诱导治疗能够使得APL的初期诱导缓解率达到90%以上。药物诱导治疗之后，给予短程化疗和结合以维甲酸和三氧化二砷的药物进行维持治疗，可以使病人在2年左右的时间结束治疗并且临床治愈率高达90%。

目前，APL的病因尚不明确，但是随着分子生物学、细胞遗传学等学科的快速发展，人们对于APL分子生物学发病机制有了比较深入的了解。超过90%的APL发病的关键机制为t（15；17）（q22；q21），导致15号染色体上PML基因和17号染色体上的RARa基因形成PML-RARa融合基因。易位使15q22上的PML基因与17q21上的维甲酸受体α基因发生交互性重排，分别在15号染色体上形成PML-RARa融合基因和RARa-PML融合基因。研究表明，患者的白血病细胞均有PML-RARa融合基因的表达，仅有70%~80%的患者同时表达PML-RARa融合基因，说明PML-RARa融合基因是致病的关键。根据PML断裂点的位置不同，PML-RARa融合基因有三种亚型bcr1、bcr2和bcr3，分别称为长型（L型）、变异型（V型）和短型（S型），发生的概率则依次为55%、5%和40%。PML-RARa融合蛋白作为一种变异的维甲酸受体，相较于野生型RARa蛋白具有不同的DNA特性，是维甲酸（retinoic acid，RA）信号的抑制物，通过不同的途径称为内在而有效的RARa靶基因转录因子抑制物。

因此，当患者检测出PML-RARa融合基因突变时，可作为急性早幼粒细胞性白血病的诊断依据，也可作为对全反式维甲酸和砷剂治疗疗效预测的分子标志。

目前可用于PML-RARa融合基因的方法有探针杂交法、基因芯片法、质谱法、基因测序法及免疫荧光法等。探针杂交法假阳性率较高；基因芯片法成本高、制备方法繁琐；质谱法难以在普通医疗机构开展；基因测序法虽敏感性和特异性高，但价格比较昂贵，而且操作较繁琐，耗时较长。免疫荧光法检测PML-RARa融合基因定量表达可高通量完成临床样品检测，且特异性和敏感性都很高，其敏感性和特异性均高于直接免疫荧光检测等方法。实时荧光定量PCR（Polymerase Chain Reaction，聚合酶链式反应）与免疫荧光法相比具有特异性增强、灵敏度提高和检测快速、降低了污染等特点，且目前尚未有实时荧光定量PCR方法检测PML-RARa融合基因。

发明内容

为了解决现有技术的问题，本发明实施例提供了一种采用荧光定量PCR技术检测PML-RARa融合基因mRNA表达量的试剂盒。所述技术方案如下：

一种检测PML-RARa融合基因mRNA表达量的试剂盒，包括检测用引物、荧光探针、cDNA第一链合成试剂、荧光定量PCR混合液、阴性对照和阳性对照，所述检测用引物、荧光探针包括PML-RARaL融合基因引物、PML-RARaV融合基因引物和PML-RARa S融合基因引物中的至少一种和内参基因ABL引物及Taqman荧光探针，其中：

PML-RARa L融合基因上游引物序列如序列表中SEQ ID NO:1所示；

PML-RARa L融合基因下游引物序列如序列表中SEQ ID NO:2所示；

PML-RARa L融合基因Taqman荧光探针如序列表中SEQ ID NO:3所示；

PML-RARa V融合基因上游引物序列如序列表中SEQ ID NO:4所示；

PML-RARa V融合基因下游引物序列如序列表中SEQ ID NO:5所示；

PML-RARa V融合基因Taqman荧光探针如序列表中SEQ ID NO:6所示；

PML-RARa S融合基因上游引物序列如序列表中SEQ ID NO:7所示；