[发明专利]2型糖尿病易感性无创检测试剂盒（VDR等基因）

说明书

技术领域

本项目属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体涉及一种2型糖尿病易感基因检测试剂盒，根据检测结果从基因层面评估2型糖尿病发病的风险级别，并作为预防和治疗2型糖尿病的方向指导。

背景技术

2型糖尿病亦称为非胰岛素依赖型糖尿病，患者的主要特征为胰岛素抵抗、胰岛素相对缺乏以及高血糖。2型糖尿病主要在40岁以上的成年人中发病，占所有糖尿病患者的90%以上。2012年世界卫生组织最新数据显示我国已经成为世界第一糖尿病大国，患病率为9.7%，远高于世界平均水平。由于病因复杂加上早期症状轻微且并无酮症酸中毒和昏迷等现象，2型糖尿病一般多在病情发展多年后才被诊断发现。因此目前急需一种有效的早期检测手段。已经有研究表明遗传因素在2型糖尿病的发病过程中起着重要的作用，肿瘤坏死因子α(TNF-α)、脂联素(AdipoQ)和维生素D受体(VDR)等基因的多态性均与2型糖尿病的易感性有直接关联，在预防和治疗2型糖尿病中具有一定的预测价值。

炎症反应被认为是胰岛素抵抗的触发因素，因此TNF-α作为重要的炎症细胞因子在2型糖尿病研究中备受关注。TNF-α具有抑制外周组织葡萄糖摄取、抑制胰岛素受体及其底物磷化的作用，其过量表达可引起胰岛素抵抗。TNF-α中位于基因启动子区域的第308位G/A多态性被发现与2型糖尿病有显著相关性。国内诸多研究表明在2型糖尿病患者中308GA+AA基因型频率和308A等位基因频率有显著增加。Meta分析结果也显示亚洲人群中TNF-α的308A等位基因是2型糖尿病的危险因素，会显著增加2型糖尿病的发病率。目前普遍认为的作用机制是由于TNF-α第308位G→A突变会导致其转录水平显著上升，从而诱导胰岛素抵抗及血脂代谢紊乱。

AdipoQ是由脂肪组织特异性分泌的一种血浆激素蛋白，具有降血糖、降血脂以及提高胰岛素敏感性的作用。由于其血清水平与胰岛素敏感指数呈正相关，AdipoQ多态性在2型糖尿病发病机制研究中一直颇受重视。目前已发现由于GGT→GGG的同义突变，在AdipoQ外显子2中存在Gly15Gly多态性。有研究表明，在2型糖尿病患者中AdipoQ外显子2 Gly15Gly位点处的G等位基因频率与GG基因型频率要显著高于对照人群，因此认为AdipoQ是2型糖尿病的易感基因。由于T→G同义突变并未改变AdipoQ的氨基酸序列，故该突变被认为是由于密码子使用频率的差异而影响了AdipoQ的翻译效率。

由于维生素D对胰岛细胞具有保护作用并能维持胰岛素正常分泌和糖耐受，VDR的基因多态性也与2型糖尿病的发生有密切关联。已经有研究表明VDR基因FokI位点的存在（f等位基因）会增加2型糖尿病的发病率。在2型糖尿病患者中f等位基因频率和ff基因型频率有显著上升且ff基因型的2型糖尿病患者在口服葡萄糖耐量后分泌的胰岛素会明显减少。因此VDR基因的f等位基因是2型糖尿病发病的危险因子。其普遍认为的作用机制是FokI位点的存在使VDR有2个翻译起始位点（ATG）并允许翻译合成活性较低的VDR蛋白，从而降低了VDR蛋白总体的有效活性。

综上所述，鉴于TNF-α基因、AdipoQ基因和VDR基因在2型糖尿病疾病中体现出来的疾病显著相关性，可以通过检测这些2型糖尿病发生相关基因位点的基因型来及时筛查出易患2型糖尿病的高危人群，从而有针对性地预防和治疗2型糖尿病，这对于降低2型糖尿病的发病率有非常重要的意义。

发明内容

基于检测TNF-α基因上G-308A（rs1800629）、ADIPOQ基因上的Gly15Gly（rs2241766）、VDR 基因上Fok I （rs10735810）的3个单核苷酸多态性位点基因型可作为评估2型糖尿病发病的危险因子的基础上，本发明提供一种检测2型糖尿病遗传易感性的试剂盒。

该试剂盒包括：

检测TNF-α基因上G-308A（rs1800629）、ADIPOQ基因上的Gly15Gly（rs2241766）、VDR 基因上Fok I （rs10735810）的3个单核苷酸多态性位点基因型的特异性引物对及DNA测序引物；

PCR反应组件（包括Taq酶、dNTP混合液、反应缓冲液、ddH2O等）；

PCR产物纯化组件（包括SAP酶、ExoI酶、ddH2O等）；

DNA测序反应组件（包括BigDye mix，EDTA溶液、100%乙醇溶液、70%乙醇溶液、HIDI溶液、ddH2O等）。