[发明专利]高血压易感性无创检测试剂盒（GNB3等基因）

说明书

技术领域

本项目属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体涉及一种高血压易感基因检测试剂盒，根据检测结果从基因层面评估高血压发病的风险级别，并作为预防和治疗高血压的方向指导。

背景技术

高血压是指在静息状态下动脉收缩压和/或舒张压增高为主要临床表现的综合症，可分为病因不明的原发性高血压和由明确独立疾病所引起的继发性高血压。其中，原发性高血压患者占高血压患者总数的95%以上。有调查结果显示，59%的原发性高血压患者都有家族史，说明遗传因素对于高血压的发生具有重要影响。长期高血压是造成心脑血管疾病死亡的重要原因。因此开发出一种高效、便捷的高血压易感性检测技术将对于预防和治疗高血压具有积极的意义。目前已经有研究表明G蛋白β3亚基（GNB3）、亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)和转化生长因子β1（TGFβ1）等基因的多态性均与高血压的易感性有直接关联，在预防和治疗高血压中具有一定的预测价值。

G蛋白是一种重要的细胞信号转导蛋白，在细胞膜受体和效应蛋白间的信号传递中起着重要的中介作用。GNB3的第825位C→T突变（C825T）会导致表达产生一个截短型的但是具有功能活性的剪接变异体GNB3s。在高加索人群中携带有825T等位基因的人患高血压的危险性显著增加。在汉族人群的单基因分析中尚未发现GNB3基因C825T基因多态性与高血压的直接相关性，但是在GNB3基因235T等位基因携带者中却发现GNB3基因825T等位基因会显著增加高血压的发病危险。因此GNB3基因825T等位基因被认为是高血压发病的一个危险因素。

MTHFR是同型半胱氨酸（Hcy）代谢途径中的关键酶。MTHFR基因的第677位C→T突变（C677T）会使其编码的氨基酸从丙氨酸变为缬氨酸，从而影响酶的活性及热稳定性并使血浆中Hcy浓度升高，而Hcy水平的升高与高血压的发病密切相关。研究显示原发性高血压患者中MTHFR基因C677T位点的TT基因型频率和T等位基因频率均高于正常人群且677TT基因型对Hcy型高血压的发病危险有显著贡献。因此MTHFR是高血压发病的一个易感基因。

TGFβ1是具有多种生物活性的细胞因子，可调控内皮素生成并影响肾素-血管紧张素系统使血压升高，在介导心血管疾病的发生中起着重要的作用。研究发现TGFβ1第869位T→C突变（T869C）可使TGFβ1的血清水平上升并且在高血压患者中C等位基因频率有显著增高。因此认为TGFβ1基因的869C等位基因是通过上调了TGFβ1的表达水平而增加了高血压的发病风险，是高血压发病的一个危险因素。

综上所述，鉴于GNB3基因、MTHFR基因和TGFβ1基因在高血压疾病中体现出来的疾病相关性，可以通过检测这些高血压发生相关基因单核苷酸位点基因型及时筛查出易患高血压的高危人群，从而有针对性地预防和治疗，这对于降低高血压的发病率有非常重要的意义。

发明内容

基于GNB3基因上C825T (rs5443)、MTHFR基因上C677T(rs1801133)、TGF-Β1基因上T869C (rs1982073)的3个单核苷酸多态性位点基因型可用来评估高血压发病风险级别，本发明提供一种高血压基因无创检测试剂盒。

该试剂盒包括：

检测GNB3基因上C825T (rs5443)、MTHFR基因上C677T(rs1801133)、TGF-Β1基因上T869C (rs1982073)的3个单核苷酸多态性位点基因型的特异性引物对及DNA测序引物；

PCR反应组件（包括Taq酶、dNTP混合液、反应缓冲液、ddH2O等）。

PCR产物纯化组件（包括SAP酶、ExoI酶、ddH2O等）。

DNA测序反应组件（包括BigDye mix，EDTA溶液、100%乙醇溶液、70%乙醇溶液、HIDI溶液、ddH2O等）。

本发明试剂盒的组分和含量包括：

PCR反应体系：10×PCR反应缓冲液 2.5ul；25mM dNTP混合液0.2ul；5U/ul Taq DNA聚合酶0.125ul；20uM特异性引物对（每条引物各0.25ul）；ddH2O 19.175ul。

PCR产物纯化体系：1U/ul SAP酶 0.75ul；10U/ul ExoI酶0.375ul；ddH2O 3.875ul。